内耳血液迷路関門の透過性制御に基づく薬剤性難聴の予防手段の樹立

基于内耳血迷路屏障渗透性控制的药物性听力损失预防措施的建立

• 批准号: 22K09702
• 负责人: 西尾 綾子
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09702/
• 关键词: 薬剤性難聴; 血液迷路関門; 内耳

マウス血液迷路関門（BLB）の成立時期の確認から開始した。日齢6（P6）からP21までのC57BL/6J野生型マウスにPBSまたはFM 1-43 dyeを皮下注射し、24時間後に安楽死させた。内耳を取り出し固定したのち、蝸牛感覚上皮を取り出して、有毛細胞を抗Myosin VI抗体と蛍光標識二次抗体で標識した。FM dyeの有毛細胞への取込は、P11からP14の間で急激に減少したことから、この期間にBLBが成立するものと考えられた。Texas Redで標識したゲンタマイシン（GTTR）でも、同様の実験を行い、全身投与したGTTRの有毛細胞への移行量は、上記のBLB成立以降に急激に減少することを確認した。次に、BLB成立後のマウスにおいて、lipopolysaccharide（LPS）誘発性炎症によるBLB透過性の変化を調べた。4-8週齢のC57BL/6J野生型マウスにPBSまたはLPSを静注し、24時間後にPBSまたはGTTRを皮下注射して、さらに24時間経過した時点で安楽死させ、内耳を取り出し固定したのち、蝸牛感覚上皮を取り出して、有毛細胞を抗Myosin VI抗体と蛍光標識二次抗体で標識した。LPS投与によりGTTRの有毛細胞への移行量が増加することが確認された。この結果より、LPS投与によりBLBの透過性が亢進したものと推測された。続いて、アミノグリコシドであるカナマイシンの全身投与により出現する難聴が、LPS投与により増悪するか確認する実験を開始した。現在、カナマイシンおよびLPSの適当な投与量および投与期間について検討中である。

The establishment period of BLB is confirmed. C57BL/6J wild-type C57BL/6J was injected subcutaneously with PBS FM 1-43 dye and died 24 hours later. The inner ear is fixed, the snail sensory epithelium is extracted, and the hairy cells are labeled with anti-Myosin VI antibodies and secondary antibodies. FM dye hair cell selection, P11, P14, rapid excitation, BLB, establishment, examination Texas Red Flag (GTTR), the same behavior, the whole body cast and GTTR hairy cell migration, the above BLB establishment to reduce the stress, the same behavior confirmed After BLB was established, lipopolysaccharide (LPS) induced inflammation and BLB permeability were modulated. 4-8 C57BL/6J wild-type cells were injected intravenously with PBS and GTTR 24 hours later. The cells were isolated from the inner ear and fixed. Hairy cells were identified with anti-Myosin VI antibodies. LPS administration was associated with an increase in the migration of hairy cells in GTTR. The result is that LPS is not available for BLB transmission. The whole body of the patient is ready to receive treatment. Now,