内耳血液迷路関門の透過性制御に基づく薬剤性難聴の予防手段の樹立

マウス血液迷路関門（BLB）の成立時期の確認から開始した。日齢6（P6）からP21までのC57BL/6J野生型マウスにPBSまたはFM 1-43 dyeを皮下注射し、24時間後に安楽死させた。内耳を取り出し固定したのち、蝸牛感覚上皮を取り出して、有毛細胞を抗Myosin VI抗体と蛍光標識二次抗体で標識した。FM dyeの有毛細胞への取込は、P11からP14の間で急激に減少したことから、この期間にBLBが成立するものと考えられた。Texas Redで標識したゲンタマイシン（GTTR）でも、同様の実験を行い、全身投与したGTTRの有毛細胞への移行量は、上記のBLB成立以降に急激に減少することを確認した。次に、BLB成立後のマウスにおいて、lipopolysaccharide（LPS）誘発性炎症によるBLB透過性の変化を調べた。4-8週齢のC57BL/6J野生型マウスにPBSまたはLPSを静注し、24時間後にPBSまたはGTTRを皮下注射して、さらに24時間経過した時点で安楽死させ、内耳を取り出し固定したのち、蝸牛感覚上皮を取り出して、有毛細胞を抗Myosin VI抗体と蛍光標識二次抗体で標識した。LPS投与によりGTTRの有毛細胞への移行量が増加することが確認された。この結果より、LPS投与によりBLBの透過性が亢進したものと推測された。続いて、アミノグリコシドであるカナマイシンの全身投与により出現する難聴が、LPS投与により増悪するか確認する実験を開始した。現在、カナマイシンおよびLPSの適当な投与量および投与期間について検討中である。

マウス血液迷路関門（BLB）の成立時期の確認から開始した。日齢6（P6）からP21までのC57BL/6J野生型マウスにPBSまたはFM 1-43 dyeを皮下注射し、24時間後に安楽死させた。内耳を取り出し固定したのち、蝸牛感覚上皮を取り出して、有毛細胞を抗Myosin VI抗体と蛍光標識二次抗体で標識した。FM dyeの有毛細胞への取込は、P11からP14の間で急激に減少したことから、この期間にBLBが成立するものと考えられた。Texas Redで標識したゲンタマイシン（GTTR）でも、同様の実験を行い、全身投与したGTTRの有毛細胞への移行量は、上記のBLB成立以降に急激に減少することを確認した。次に、BLB成立後のマウスにおいて、lipopolysaccharide（LPS）誘発性炎症によるBLB透過性の変化を調べた。4-8週齢のC57BL/6J野生型マウスにPBSまたはLPSを静注し、24時間後にPBSまたはGTTRを皮下注射して、さらに24時間経過した時点で安楽死させ、内耳を取り出し固定したのち、蝸牛感覚上皮を取り出して、有毛細胞を抗Myosin VI抗体と蛍光標識二次抗体で標識した。LPS投与によりGTTRの有毛細胞への移行量が増加することが確認された。この結果より、LPS投与によりBLBの透過性が亢進したものと推測された。続いて、アミノグリコシドであるカナマイシンの全身投与により出現する難聴が、LPS投与により増悪するか確認する実験を開始した。現在、カナマイシンおよびLPSの適当な投与量および投与期間について検討中である。