Naive型多能性幹細胞の多分化能修復による分化指向性と眼関連細胞発生機序の解明

通过幼稚多能干细胞的多能性恢复阐明分化倾向和眼相关细胞发育机制

• 批准号: 22K09813
• 负责人: 片山 朋彦
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09813/
• 关键词: 多能性幹細胞; Naive化; 角膜上皮; 分化指向性; ナイーブ化; 角膜分化

本研究では株間差による分化誘導効率の相違の要因と思われる多能性幹細胞の分化指向性の機序を明らかにすることが目的である。初年度では多能性幹細胞の分化指向性の克服のため、これまで眼関連細胞の誘導方法であるヒト眼オルガノイド：SEAM（Hayashi R et.al. Nature 2016.）を用いて角膜上皮細胞の誘導が困難であった多能性幹細胞（3株）を利用し、多能性幹細胞のNaive化の誘導を実施した。既報であるケミカルリセッティング法（Y.Takashima et al. Cell 2014, G.Guo et al. Development 2018）を用いて遺伝子改変無くNaive化の誘導を行った。Naive誘導し、数継代培養を行った細胞は、代表的なNaiveマーカーであるTFCP2L1, KLF17, DPPA5らの発現がqPCR、免疫蛍光染色によって確認できた。これにより本年度の研究計画予定通りにSEAM誘導を介した角膜上皮細胞の誘導が困難である多能性幹細胞3株からNaive-iPS細胞の作製が完了できた。現在、詳細なNaive状態の確認を行うと共に、追加のNaive-iPS細胞の作製に取り組んでいる。また、作製できた3株のNaive-iPS細胞を使用し、SEAMを介した角膜上皮細胞の誘導が可能であるか、既に分化誘導実験を開始している。現時点では、Naive化以前のiPS細胞では困難であったSEAM誘導が、Naive化を介することで正常なSEAM構造を誘導できていることが確認できており、特に角膜上皮前駆細胞が発生、出現していることを確かめている。よって本研究の狙いである多能性幹細胞のNaive化による分化能の改善、が有効であることが示唆されている。

The aim of this study is to clarify the mechanism of differentiation orientation of pluripotent stem cells. Methods for Overcoming Differentiation Directivity of Pluripotent Stem Cells in Early Years: SEAM (Hayashi R et.al. Nature 2016.) It is difficult to induce pluripotent stem cells (3 strains) using corneal epithelial cells, and the induction of pluripotent stem cells is carried out It has been reported that the method (Y.Takashima et al. Cell 2014, G.Guo et al. Development 2018) has been used to modify the induction of Naive transformation. Naive induction, several generations of cells, representative of Naive TFCP2L1, KLF17, DPPA5 development, qPCR, immunoluminescence staining This year's research plan is scheduled to be completed. SEAM induction is difficult to induce corneal epithelial cells. The production of 3 pluripotent stem cells is completed. Now, confirm Naive status, add Naive-iPS cell operation, select group. 3 Naive-iPS cells were cultured and induced by SEAM. At present, iPS cells before Naive transformation are difficult to induce SEAM, Naive transformation is mediated, normal SEAM structure is induced, confirmation is confirmed, and corneal epithelial anterior cells are generated and appear. In this study, we found that the differentiation ability of pluripotent stem cells was improved, and there was no difference between them.