LIMK2に注目した、肥厚性瘢痕・ケロイドのコントロール

以 LIMK2 为重点控制肥厚性疤痕和疤痕疙瘩

• 批准号: 22K09881
• 负责人: 黒田 一也
• 金额: $ 2万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09881/
• 关键词: LIMK2; アポトーシス; RhoA; ケロイド; 肥厚性瘢痕

①活性型および不活性型LIM kinase2を発現するアデノ随伴ウイルスベクターの作成遺伝子導入のための２型アデノ随伴ウイルスベクターを作成するために、pAAV-CMV-LIMK2-GFPベクターを購入した。pAAV-CMV-LIMK2-GFPベクターのLIMK2の505番目の塩基Threonine (ACG)を PCR法を用いてGlutamic AcidおよびValine に変異させ、LIM kinase2の活性型および不活性型(それぞれGFP tag付き)を発現するベクターを構築した。TAKARA AAV purification kit を用いてLIMK2のconstitutive activeおよびdominant negativeを発現する２型アデノ随伴ウイルスベクターを作成した。コントロールとして、GFPのみを発現するAAV２ベクターを作成した。②LIM kinase2の活性型を導入した際の伸展刺激に対する反応正常線維芽細胞に活性型LIMK2およびコントロールとしてGFPの遺伝子導入を行い、伸展刺激を加えた。ウエスタンブロッティングでリン酸化cofilinおよびαSMAの発現を確認した。正常線維芽細胞およびAAV2-GFP導入線維芽細胞では、伸展刺激を加えていない群と比較して、加えた群でリン酸化cofilinおよびαSMAの発現は上昇を認めた。一方はAAV2-LIMK2-mutant-GFP導入線維芽細胞では伸展刺激を加えても、加えていない群と比較して リン酸化cofilinおよびαSMAの発現は同程度であった。このことから、LIMK2が通常でリン酸化が亢進している場合、伸展刺激に対しそれ以上のリン酸化促進が認められず、筋線維芽細胞への分化促進が起こりにくいと考えられ、線維芽細胞から筋線維芽細胞への分化をコントロールできる可能性が示唆された。

①Active type およびInactive type LIM kinase 2を発成するアデノ companion ウイルスベクターの成缝子 Imported のための2 type アデノ companionウイルスベクターを was made by するために, and pAAV-CMV-LIMK2-GFP ベクターを was purchased from した. pAAV-CMV-LIMK2-GFP ベクターのLIMK2 の505片目の塩组Threonine (ACG) を PCR method を Use いてGlutamic Acid およびValine に変different させ、LIM The active type of kinase2 is the inactive type (GFP tag pays) and the structure is constructed. TAKARA AAV purification kit is made with いてLIMK2のconstitutive activeおよびdominant negativeを発appears する2 type アデノ accompanying ウイルスベクターを.コントロールとして, GFPのみを発成するAAV２ベクターを成した. ②LIM The active form of kinase 2 is introduced into the active form of the stretch-stimulating reaction of normal lineage bud cells. LIMK2 およびコントロールとしてGFPの伝子 Introduction を行い、Stretch stimulation をAdd えた.ウエスタンブロッティングでリンacidified cofilinおよびαSMAの発appearsをconfirmedした. Normal lineage bud cells AAV2-GFP is introduced into lineage bud cells, stretch stimulation groupとCompare して, add えたgroup でリンacidified cofilin およびαSMAの発 appear はrise をcognize めた. One side introduces AAV2-LIMK2-mutant-GFP into line-dimensional bud cells and performs stretch stimulation and comparison. The appearance of リンacidified cofilin is the same as αSMA.このことから, LIMK2 がNormal でリン acidification が が いる occasion, stretch stimulation に対しそれ のリン oxidation promotion が められず, muscle line dimension The differentiation of bud cells is promoted and the possibility of differentiation of bud cells and the possibility of bud cells are promoted.