LIMK2に注目した、肥厚性瘢痕・ケロイドのコントロール

以 LIMK2 为重点控制肥厚性疤痕和疤痕疙瘩

• 批准号: 22K09881
• 负责人: 黒田 一也
• 金额: $ 2万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09881/
• 关键词: LIMK2; アポトーシス; RhoA; ケロイド; 肥厚性瘢痕

①活性型および不活性型LIM kinase2を発現するアデノ随伴ウイルスベクターの作成遺伝子導入のための２型アデノ随伴ウイルスベクターを作成するために、pAAV-CMV-LIMK2-GFPベクターを購入した。pAAV-CMV-LIMK2-GFPベクターのLIMK2の505番目の塩基Threonine (ACG)を PCR法を用いてGlutamic AcidおよびValine に変異させ、LIM kinase2の活性型および不活性型(それぞれGFP tag付き)を発現するベクターを構築した。TAKARA AAV purification kit を用いてLIMK2のconstitutive activeおよびdominant negativeを発現する２型アデノ随伴ウイルスベクターを作成した。コントロールとして、GFPのみを発現するAAV２ベクターを作成した。②LIM kinase2の活性型を導入した際の伸展刺激に対する反応正常線維芽細胞に活性型LIMK2およびコントロールとしてGFPの遺伝子導入を行い、伸展刺激を加えた。ウエスタンブロッティングでリン酸化cofilinおよびαSMAの発現を確認した。正常線維芽細胞およびAAV2-GFP導入線維芽細胞では、伸展刺激を加えていない群と比較して、加えた群でリン酸化cofilinおよびαSMAの発現は上昇を認めた。一方はAAV2-LIMK2-mutant-GFP導入線維芽細胞では伸展刺激を加えても、加えていない群と比較して リン酸化cofilinおよびαSMAの発現は同程度であった。このことから、LIMK2が通常でリン酸化が亢進している場合、伸展刺激に対しそれ以上のリン酸化促進が認められず、筋線維芽細胞への分化促進が起こりにくいと考えられ、線維芽細胞から筋線維芽細胞への分化をコントロールできる可能性が示唆された。

1. Active and inactive LIM kinases 2 are produced in the presence of pAAV-CMV-LIMK2-GFP and are introduced into the production of pAAV-CMV-LIMK2-GFP. pAAV-CMV-LIMK2-GFP was constructed by PCR for the detection of Glutamic Acid and Valine, and for the detection of LIM kinase2 active and inactive forms (other than GFP tag). TAKARA AAV purification kit uses LIMK2's constitutive active and dominant-negative to generate the type 2 virus. AAV2 is the first time that GFP has been detected. (2) When LIM kinase2 is introduced into normal cells, stretch stimulation is applied to the expression of LIM kinase2 and GFP kinase2. It is important to identify the development of αSMA and α SMA. The expression of cofilin and αSMA in normal line cells induced by AAV2-GFP was increased by increasing the number of cofilin and αSMA. The expression of cofilin and αSMA was similar to that of AAV2-LIMK2-mutant-GFP transfected cells. In general, LIMK2 is stimulated by acidification. In addition, the possibility of promoting differentiation of tendon and vascular bud cells is also indicated.