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ゲノム編集を利用した膜結合型および遊離型TREM2の骨免疫学的機能の解析

使用基因组编辑分析膜结合和游离 TREM2 的骨免疫功能

基本信息

批准号：
22K09948
负责人：
坂東健二郎
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Meikai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09948/
关键词：
TREM2 sTREM2 マクロファージ LPS CXCL10 CXCL11 macrophage exosome

项目摘要

マクロファージをLPSで刺激した際の応答についてTREM2が関与しているかどうかを確認するため、マウスマクロファージ細胞株RAW264.7細胞のTREM2をsiRNAによりノックダウンし、LPS刺激後2時間後のおよそ30種類のケモカインの遺伝子発現を確認した。すると、Ccl2、Ccl4、Ccl5、Cxcl10、Cxcl11の発現がTrem2遺伝子ノックダウンにより、抑制された。この結果から、これらのケモカイン遺伝子のLPSによる誘導にはTREM2が関与していると考えられる。次に、細胞膜上に発現しているTREM2と培地中に遊離しているsoluble TREM2 (sTREM2)をフローサイトメトリーとELISAによって解析したところ、マクロファージの細胞膜上にあるTREM2は恒常的に培地中に遊離しており、24時間で約4 ng/mLに達していた。また、RAW264.7細胞をLPS刺激すると、細胞膜上のTREM2は急速に減少し、培地中に遊離することも判明した。これらの結果から、培地中に遊離したsTREM2もマクロファージのLPSによるケモカイン誘導に関わっているのではないかと考えた。RAW264.7細胞のTrem2遺伝子をsiRNAでノックダウンし、LPS刺激時にrecombinant sTREM2 (rsTREM2)を培地に添加したところ、Ccl2、Ccl4、Ccl5の発現はrsTREM2に影響を受けなかったが、Trem2のノックダウンで抑制されたCxcl10とCxcl11の発現はrsTREM2添加により一部、回復した。これらの結果は、マクロファージのLPS刺激時に、一部のケモカインの発現にTREM2が関与しており、Cxcl10とCxcl11の発現については遊離型のsTREM2を介していることを示唆している。

The expression of TREM2 siRNA in RAW264.7 cells was confirmed 2 hours after LPS stimulation. Ccl2, Ccl4, Ccl5, Cxcl10 and Cxcl11 are detected by Trem2. The results are as follows: TREM2 is related to LPS, which is induced by LPS. TREM2 (sTREM2) was detected on the cell membrane and dissociated from the culture medium in about 4 ng/mL in 24 hours. RAW264.7 cells were stimulated by LPS, TREM2 on the cell membrane decreased rapidly, and the free cells in the culture medium were identified. The results of this study are as follows: RAW264.7 cells Trem2 gene siRNA can be used to recombine sTREM2 (rsTREM2) when stimulated by LPS. The expression of Ccl2, Ccl4 and Ccl5 is affected by rsTREM2, and the expression of Trem2 gene can be inhibited by Cxcl10 and Cxcl11. The results showed that when LPS was stimulated, the expression of TREM2 was related to the expression of Cxcl10 and Cxcl11, and the expression of sTREM2 was related to the expression of Cxcl10 and Cxcl11.