ARONJ治療に用いるMSC由来エクソソームの責任因子および作用機序の同定

用于 ARONJ 治疗的 MSC 衍生外泌体的作用因素和作用机制的鉴定

• 批准号: 22K10014
• 负责人: 西澤 悟
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K10014/
• 关键词: エクソソーム; 顎骨壊死; 薬剤性顎骨壊死; 間葉系幹細胞; 再生医療

C57/BL6マウスの腹部から脂肪を採取し、酵素処理によって間葉系幹細胞を単離した。単離した細胞をウシ胎児血清添加培地で第３継代まで培養し凍結保存した細胞を本研究に使用した。間葉系幹細胞をウシ胎児血清添加培地で70～80%コンフルエントまで培養後、リン酸緩衝液で洗浄し、無血清培地に交換して24時間培養後に培養上清を回収した。この培養上清を密度勾配遠心法で5つのフラクションに分画し、各フラクションに含まれる小型細胞外小胞(small extracellular vesicles, sEVs)を超遠心法で分離精製した。得られたsEVsはInternational Society for Extracellular Vesiclesのガイドラインに適合するsEVsであることを確認するため、電子顕微鏡によるサイズ、形態、コンタミネーションの確認。ウエスタンブロット法による各種マーカー発現(CD9、CD63、CD81、ALIX、HSP70、HSP90)の確認、ミトコンドリアなどの蛋白夾雑物混入の有無を評価する予定である。MSC-sEVs各サブタイプのビスホスホネートによる細胞障害に対する保護作用を検討するため、C57/BL6マウスから採取した骨芽細胞、線維芽細胞をゾレドロン酸存在下、およびゾレドロン酸＋MSC-sEVs存在下で培養した。そしてゾレドロン酸による細胞障害作用（ベータガラクトシターゼ陽性細胞の出現頻度、老化関連因子p21、pRBの発現、スクラッチテストによる細胞遊走能の低減など）を指標としてMSC-sEVsの細胞保護作用をサブタイプごとに評価する実験系を立ち上げている。sEVsの効果を検証するために使用する薬剤性顎骨壊死モデルマウス作製時の発症率の向上を目指し、絹糸によるリガチャーの追加、局所へのエンドトキシンの投与により発症率が向上するか検討をおこなっている。

C57/BL6 ウス ウス <s:1> abdominal ら fat を treated with <s:1> and enzyme によって mesenchymal stem cells を単 isolated from た た. 単 from し た cells を ウ シ fetal serum add where the petty で 継 3 generation ま で cultivate し freezing preservation し た cells を に this study use し た. Department of mesenchymal stem cells を ウ シ fetal serum add where the petty で 70 ~ 80% コ ン フ ル エ ン ト ま で after incubation, リ ン で し at acid buffer, serum-free culture exchange し に て に after 24 time cultivating culture supernatant を back 収 し た. こ の culture supernatant を density hook with far art で 5 つ の フ ラ ク シ ョ ン に points draw し, each フ ラ ク シ ョ ン に containing ま れ る small extracellular small cell (small extracellular vesicles, sEVs) を buzzer-beaters art で separation of refined し た. Have to ら れ た sEVs は International Society for Extracellular Vesicles の ガ イ ド ラ イ ン に for す る sEVs で あ る こ と を confirm す る た め, electronic 顕 micromirror に よ る サ イ ズ, shape, コ ン タ ミ ネ ー シ ョ ン の confirmation. ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ ト method に よ る various マ ー カ ー 発 now (CD9, CD63, CD81, ALIX, HSP70 and HSP90) の confirmation, ミ ト コ ン ド リ ア な ど の protein clip 雑 の with presence of を review 価 す る designated で あ る. MSC - sEVs each サ ブ タ イ プ の ビ ス ホ ス ホ ネ ー ト に よ る cells handicap of に す seaborne る protection を beg す 検 る た め, C57 / the BL6 マ ウ ス か ら take し た bone, line d bud bud cells を ゾ レ ド ロ ン acid in the presence of, お よ び ゾ レ ド ロ ン で cultivation in the presence of acid + MSC - sEVs し た. そ し て ゾ レ ド ロ ン acid に よ る cells handicap (ベ ー タ ガ ラ ク ト シ タ ー ゼ positive cells の frequency, aging masato even factor p21, lm-prb の 発 now, ス ク ラ ッ チ テ ス ト に よ る cells could wander の low cut な ど) を index と し て MSC - sEVs の cell protection を サ ブ タ イ プ ご と に review 価 す る be 験 を made ち fasten Youdaoplaceholder0 げて る. SEVs の unseen fruit を 検 card す る た め に use す る 薬 tonic sex jawbone 壊 die モ デ ル マ ウ ス make system の の 発 disease rate upward を refers し and spun silk si に よ る リ ガ チ ャ ー の appending, bureau へ の エ ン ド ト キ シ ン の cast with に よ り が 発 disease rate upward す る か beg を 検 お こ な っ て い る.

项目成果

Involvement of impaired angiogenesis and myelosuppression in antiresorptive-agent related osteonecrosis of the jaw mouse model

血管生成受损和骨髓抑制参与抗吸收剂相关的颌骨小鼠模型骨坏死

• 发表时间: 2023
• 期刊: Tokai J Exp Clin Med.
• 作者: Hisao Igarashi;Satoru Nishizawa;Takeshi Miyamoto;Atsuhiko Hikita;Kazuto Hoshi
• 通讯作者: Kazuto Hoshi