培養骨膜細胞の機能性移植基材としてのＲＧＤペプチドおよびＤＢＭの有効性解析

RGD肽和DBM作为培养骨膜细胞功能移植基质的功效分析

基本信息

批准号：
22K10033
负责人：
永田昌毅
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K10033/
关键词：
培養骨膜細胞骨再生 RGDペプチド脱灰骨基質移植基材ＲＧＤ

项目摘要

【予備実験の実施】患者ボランティアから採取したヒト培養骨膜細胞を製造し、分散細胞を液体窒素に保存し、細胞ストックを作成した。　背部移植について予備実験の準備を実施した。ただし、入手可能なチタンメッシュではラットに適する大きさのケージ作成が困難であったため、実験方法の変更を検討した。①ポリ乳酸系樹脂プレートで直径9mmの皿状シェル(高さ1mm)を作成し、これをケースとしてラット頭蓋骨上に移植材を置く方法に変更し、その実施可能性を検討した。予備実験の結果、移植材が感染を起こさず、頭部組織に同化される所見が確認された。②実施可能性を検証する予備実験として、RGDペプチドおよび脱灰骨基質(DBM)にヒト培養骨膜細胞1×100000個を浸潤させ、これをポリ乳酸シェルに入れ、ヌードラット頭蓋上に移植した。4週間の待機期間の後、肉眼的に骨形成が確認された。【組織学的解析】適切な評価法を確立するため、非脱灰切片作成（川本法）の採用準備を進めた。【細胞製造方法の改良】①安定した細胞製造の確立ならびに特性と細胞含有量の均質化を目的に、細胞を3cmデスク上で培養する方法を検討した。培養期間を5週間に延長することによって、3㎝の均一な大きさの細胞シートの製造が可能であることが示された。②培地の最適化を目的に基礎培地に含まれる成分の調整を行い、最低含量で最大の細胞増殖とこれまで同様の骨原性の性質を維持する培養製造方法の探索的実験を実施した。

[初步实验]产生了从患者志愿者那里收集的人培养的骨膜细胞，将分散的细胞存储在液氮中，并产生细胞库存。进行了背植入的制备实验。但是，由于可用的钛网格难以创建适合大鼠的尺寸的笼子，因此我们考虑了更改实验方法。 1）使用直径为9mm的圆锥形壳树脂板创建盘状壳（1mm高），然后更改为使用此情况，将植入物材料放在大鼠头骨上的方法，并检查了该实现的可能性。初步实验证实，该植入物未被感染，并被吸收到头部组织中。 2）作为验证结果可行性的初步实验，将1 x 100,000人骨膜细胞浸入RGD肽中，并将其脱钙的骨基质（DBM）浸入，这些骨基质（DBM）置于多乳酸壳中，并将其植入裸大鼠头骨。在等待了4周之后，严重确认了骨形成。 [组织学分析]为了建立一种适当的评估方法，为创建非定位部分（川本方法）的准备准备。 [改进细胞制造方法] 1）研究了一种在3厘米桌上培养细胞的方法，以建立稳定的细胞制造并使性能和细胞含量均匀化。结果表明，将培养期延长至5周，以生产3厘米的均匀大小的细胞表。 ②为了优化培养基，调整了基础培养基中包含的成分，并进行了探索性实验，以执行一种培养基生产方法，该方法将最高细胞增殖的含量保持在最低含量和与以前相同的成骨特性。