Establishment of a method for differentiation characterization of stem cell clones using frozen sections and its application to stem cell sorting

冰冻切片干细胞克隆分化表征方法的建立及其在干细胞分选中的应用

• 批准号: 22K10206
• 负责人: 田所 晋
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Tsurumi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K10206/
• 关键词: 再生医療; 凍結切片上培養; 分化誘導; 幹細胞; 凍結切片; 細胞増殖因子; 細胞培養

現在行われている生体臓器移植や、人工臓器移植などの先端医療には、それぞれ拒絶反応や耐久性、機械的強度などの様々な問題点や限界がある。再生医療の実用化を目指す上で重要になるのが最適な細胞源の確保と分化誘導法の確立であるが、現在、細胞源の候補である胚性幹細胞、成体幹細胞、人工多能性幹細胞、いずれにおいても、どの臓器の再生を目指すときにどの細胞が最適であるかというところは不明のままである。また、分化誘導法としても、増殖・分化因子の組み合わせを添加し培養する方法が主流であり、添加因子の理想的組み合わせは未だに十分とは言い難く、決定は困難であるのが現状である。そこで本研究では、これまでに申請者らがiPS細胞の分化誘導と品質管理において報告してきた方法を応用し、再生を目指す目的臓器の凍結切片上で各種幹細胞の培養を行うことにより細胞分化を誘導し、その誘導効率の差からそれぞれの幹細胞の目的臓器の機能細胞への分化しやすさ(分化特性)を評価することにより、どのような状態の幹細胞が目的臓器・組織再生のための細胞源として最適かを簡便かつ安価に検証し、選別できる新たな評価法を確立することを目的に研究を進めた。本年度は、マウスの各種臓器・組織(脳、脊髄、肝臓、心臓、筋肉、唾液線、脂肪組織等)の凍結切片を作成し、これまでにわれわれが報告してきたiPS細胞の凍結切片上での培養法に準じて、それぞれの凍結切片上で、各種のヒト由来幹細胞(骨髄間葉系 幹細胞、歯髄幹細胞、脂肪組織由来幹細胞等:Lonza、RIKEN等から入手予定)を培養するが、まずは我々が多く取り扱っている歯髄幹細胞を対象に、すでに本法によりiPS細胞の分化誘導が可能なことが確認され、誘導効率の差による品質評価が可能であることが明らかとなっている脳、脊髄および肝臓を優先して文化誘導を試み、検証を続けている。

Now line わ れ て い る living body of the viscera や, artificial viscera to transplant な ど の apex medical に は, そ れ ぞ れ refused to reverse 応 や durability, mechanical strength な ど の others 々 な problem point や limit が あ る. Regenerative medical の be use the を refers on important に で す な る の が optimum な cells source の ensure と candidated の establish で あ る が, now, cell source の alternate で あ る embryonic stem cells, adult stem cells, induced pluripotent stem cells, い ず れ に お い て も, ど の viscera の regeneration を refers す と き に ど の cells が optimum で あ る か と い う と こ ろ は is unknown Youdaoplaceholder0. ま た and divided the candidated と し て も, raised colonization, the differentiation factor の group み わ せ を add し cultivate す る method が mainstream で あ り, add factor の ideal group み わ せ は not だ に very と は い く difficult, difficult decision は で あ る の が status quo で あ る. そ こ で this study で は, こ れ ま で に applicants ら が の iPS cell differentiation induced と quality management に お い て report し て き た method を 応 し, renewable を refers on viscera の freezing slice で す purpose of various stem cell line の cultivate を う こ と に よ り cell differentiation induced を し, そ の inducing poor working rate の か ら そ れ ぞ れ の stem cells の objective function of viscera の is fine Cell へ の differentiation し や す さ (features) differentiation を review 価 す る こ と に よ り, ど の よ う な が purpose viscera state の stem cells, tissue regeneration の た め の cell source と し て optimum か を simple か つ Ann 価 に 検 し, choose don't で き る new た を 価 な evaluation method to establish す る こ と を purpose を に research into め た. This year は, マ ウ ス の various viscera, organization (脳 routine is crucial, spinal marrow, liver, heart, brawn, saliva, adipose tissue, etc.) の frozen section を し, consummate こ れ ま で に わ れ わ れ が report し て き た iPS cells の frozen section on で の culture method に quasi じ て, そ れ ぞ れ の で on frozen section, various の ヒ ト origin of stem cells, bone marrow mesenchymal lineage Stem cells, 歯 marrow stem cells, adipose tissue origin of stem cells: Lonza, RIKEN か ら of designated) を cultivate す る が, ま ず は I 々 が く take more り Cha っ て い る 歯 marrow stem cells を に, seaborne す で に provisions に よ り の iPS cell differentiation induced が may な こ と が confirm さ れ, poor induction rate of unseen の に よ る quality 価 が may で あ る こ と が Ming ら か と な っ て い る 脳, spinal marrow お よ び routine liver を priority し て culture induced を try み, 検 を 続 け て い る.