一分子力学計測による酵母プリオンのコンフォメーション空間解析

使用单分子动力学测量对酵母朊病毒进行构象空间分析

• 批准号: 13F03510
• 负责人: 田中 元雅
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13F03510/
• 关键词: アミロイド; シャペロン; 一分子力学計測; 蛋白質凝集; 酵母プリオン; 分子シャペロン; プリオン病

タンパク質のモノマー状態での構造の不均一性・多様性は、その物性や機能に大きな影響を与える可能性がある。しかし、タンパク質がモノマー状態の構造として取り得る構造の幅広さ、つまりコンフォメーション空間を実験的に明らかにすることは既存の技術では難しい。本研究では、線維状のタンパク質凝集体であるアミロイド構造とプリオン株表現型の解析をこれまで我々が進めてきた酵母プリオンSup35NMの系を用いて、一分子力学計測によりSup35NMモノマーのコンフォメーション空間を解明することを目指す。特に各種シャペロンがSup35NMのコンフォメーション空間、さらにはSup35NMの凝集化に与える影響を詳しく解析するためには、活性のあるシャペロンを調製する必要がある。そこで、本年度は、大腸菌から発現させたHsp104の精製を行い、それがほぼ完全に6量体を形成すること、Sup35NMの凝集促進活性やGFPやルシフェラーゼ凝集体に対するリフォールディング活性を確認した。また、各種Hsp104変異体の精製も行い、純度の高い変異体も得られた。そこで、Sup35NMアミロイドの脱凝集化について検討を行ったところ、Hsp104のATPase活性が、脱凝集化の際のモノマー化の過程に深く関わることが示唆された。一方で、Sup35NMモノマーのオリゴマー化に対して、Hsp104が他のシャペロン群と協調して働くことが明らかになった。

Structure heterogeneity, heterogeneity, physical properties, and function of the system The structure of the state of affairs of the State of affairs In this study, the analysis of the phenotype of yeast strains in the form of linear aggregates and molecular mechanics measurements was carried out. In particular, various types of protein are required to modulate the aggregation of Sup35 NM. This year, the purification of Hsp104, the complete formation of Hsp35NM and the aggregation of Hsp35NM were confirmed. All kinds of Hsp104 are refined and purified. The ATPase activity of Hsp104 is closely related to the process of deaggregation. A party, sup35 NM, Hsp104, Hsp 106, Hsp 107, Hsp 108, Hsp 109, Hsp 109, Hsp

项目成果

Prion remodeling by Hsp104/Ssa1/Sis1 system

Hsp104/Ssa1/Sis1系统的朊病毒重塑

• 发表时间: 2014
• 作者: Yang J;lkezoe T;Nishioka C;Yokovama A.;Nishioka C;Yang J;Herry Martadinata
• 通讯作者: Herry Martadinata