魚類の脳がメス化する分子機構の解明

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これまでの研究成果から、「魚類の脳のメス化に重要な役割を有すると考えられる3種類の遺伝子hebp3、esr2b、ff1cはいずれも、卵巣由来のエストロゲンによって直接的に転写が促進され、それによってメスの脳で高い発現を示すようになる」という作業仮説を立て、これまでその仮説の検証を行ってきた。1. hebp3、esr2b、ff1cのエストロゲンの作用機序 : 3種類の遺伝子の転写活性がエストロゲンによって直接的に活性化され得るかをレポーターアッセイにて解析した結果、hebp3とesr2bの転写活性はエストロゲンの濃度依存的に上昇することが明らかとなった。さらに推定のエストロゲン応答配列様の配列に対して変異を導入する実験を行い、それぞれのエストロゲンの作用機序を解明した。以上の成果は、魚類の脳がメス化する分子機構を解明する上で重要な糸口を掴んだものであると考えている。2. hebp3の免疫組織化学染色 : 当研究室には6種類のhebp3の特異抗体が存在していたため、初年度は蛍光免疫織化学染色によって特異抗体のスクリーニングを行なった。その結果、2種類のhebp3抗体が使用可能である事が判明した。今後はhebp3のin situプローブとこれら特異抗体を用いて、発現細胞とタンパク質の局在を解析し、hebp3の発現場所と投射・輸送先を同定することで、hebp3がどのような生理学的な機能を有するか推定する。3. TALEN法によるhebp3の変異体メダカの作出 : メス特異的発現を阻害した変異体メダカ、およびhebp3のノックアウトメダカの作出、およびスクリーニングとライン化を行なっており、これら2種類の変異体を解析することによって、メス特異的なhebp3の生理的な役割を同定する。それにより、hebp3がどのような行動パターンや内分泌パターンの性差を生み出しているのかを明らかにしていく。