GPIアンカーの構造から解明するペルオキシソーム病の病態と発症メカニズム

从GPI锚结构阐明过氧化物酶体疾病的病理学和发病机制

• 批准号: 15K08303
• 负责人: 神澤 範行
• 金额: $ 3.08万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-01 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15K08303/
• 关键词: ＧＰＩアンカー; リン脂質; アルキル脂質; アルキルリン脂質; GPIアンカー; 脂質リモデリング; ペルオキシソーム病

細胞膜上に発現するグリコシルホスファチジルイノシトールアンカー（ＧＰＩアンカー）型タンパク質は大部分がアルキルアシル型であり、ＧＰＩアンカーの生合成過程でその脂質部分がジアシル型からアルキルアシル型に変換される。本研究では、その脂質変換に用いられるアルキル供与体を明らかにすると共に、ＧＰＩアンカー型タンパク質がアルキルアシル型である生理的意義を解明することを目的とした。これまでの研究では、ヒト慢性白血病由来細胞株であるＫ５６２細胞を用いて小胞体のアルキル脂質生合成系を破壊、ＧＰＩアンカー型タンパク質の脂質構造に対する影響を検討してきた。しかしながら、細胞が小さく精密質量分析を行うだけの十分量のタンパク質を得ることができなかった。そこで各種データから細胞サイズを比較検討し、細胞の表面積が大きく、かつ本実験系に用いることのできる細胞として、ヒト子宮頸がん由来細胞株であるＨｅＬａ細胞を選択した。その後、本細胞表面にタグ付のＧＰＩアンカー型タンパク質を恒常的に発現する細胞株を構築、この細胞株からさらにアルキル脂質生合成系を破壊した細胞株の構築に取り掛かった。本研究において、細胞膜の表面積が大きくかつＧＰＩアンカー型タンパク質の発現効率が良い細胞株はＨｅＬａ細胞であることが分かった。さらに本細胞株では、ノックアウト細胞の作成効率も良いことが分かった。

Most of the lipid components produced on the cell membrane are classified into different types, and the lipid components produced during the synthesis of GPI components are classified into different types. The purpose of this study is to clarify the physiological significance of lipid metabolism in the body. This study investigated the effects of GPI on lipid structure in K562 cells, a cell line derived from chronic leukemia, and on lipid synthesis in small cells. The quality of the cells was determined by the precision of the mass analysis. A comparative study of the cell surface area of various kinds of cells was conducted. The cell surface area of different kinds of cells was increased. The cell surface area of different kinds of cells were increased. The cell surface area of different kinds of cells After that, the GPI gene type and the quality of the cell line were constantly developed. The cell line was constructed and the lipid synthesis system was established. In this study, the surface area of cell membrane was increased, and the efficiency of GPI type was increased. The cell line was isolated and the cell production rate was improved.

项目成果

ゴルジ局在性複数回膜貫通型タンパク質PGAP4はGPI側鎖の合成に必須なGPI-GalNAc転移酵素である

高尔基体定位的多重跨膜蛋白 PGAP4 是 GPI-GalNAc 转移酶，对于 GPI 侧链的合成至关重要。

• 发表时间: 2015
• 作者: 平田哲也;藤田盛久;中村昇太 ;元岡大祐 ;神澤範行 ;村上良子 ;前田 裕輔 ;木下タロウ
• 通讯作者: 木下タロウ