家族性拡張型心筋症の治療に資するナノファイバーを用いたゲノム編集技術の開発

使用纳米纤维开发基因组编辑技术有助于治疗家族性扩张型心肌病

• 批准号: 22KJ2153
• 负责人: 古野 琴子
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2023
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2023-03-08 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ2153/
• 关键词: 遺伝子送達材料; ナノファイバー; 西洋わさび由来ペルオキシダーゼ; アデノ随伴ウイルスベクター

本研究では、遺伝子治療のための遺伝子送達が可能な遺伝子担持ナノファイバーの開発を目指した。遺伝子担持ナノファイバーとして、①Lipofectamine/plasmid DNA (pDNA) 複合体を担持した西洋わさび由来ペルオキシダーゼ (HRP) 酵素反応により不溶化したgelatinナノファイバー、②アデノ随伴ウイルス (AAV) ベクターを担持したグルタルアルデヒド架橋反応により不溶化したgelatinナノファイバー、③AAVベクターを担持したポリジオキサノン (PDS) ファイバーの開発に取り組んだ。①では、HRP酵素反応を用いてフェノール性水酸基 (Ph基) 修飾gelatin (Gelatin-Ph) ナノファイバーを不溶化し、その後pDNA複合体のナノファイバー表面への担持を試みた。不溶化したGelatin-PhナノファイバーをpDNA複合体を含む溶液に浸漬した後、処理したGelatin-Phナノファイバー上で細胞を培養することで、遺伝子導入やゲノム編集が可能であることを明らかにした。②では、グルタルアルデヒド架橋反応により不溶化したgelatinナノファイバーをウイルスベクターであるAAVベクターを含む溶液に浸漬することで、ナノファイバー表面へのAAVベクターの担持を試みた。処理したナノファイバー上で培養した細胞に対して遺伝子導入が可能であることを確認した。さらに、マウス肝臓での貼布した部位への領域限定的な遺伝子送達が可能であることを明らかにした。③では、縫合糸として利用されている生分解性を持つ高分子であるPDSから作製したPDSファイバーの表面に、②と同様の方法でAAVベクターを担持した。②同様に、培養細胞及びマウス肝臓に加え、マウス心臓での遺伝子導入及びゲノム編集が可能であることを明らかにした。

This study で は, but 伝 treatment の た め の heritage 伝 child served が may な heritage 伝 child take hold ナ ノ フ ァ イ バ ー の open 発 を refers し た. Heritage 伝 child take hold ナ ノ フ ァ イ バ ー と し て, (1) Lipofectamine/plasmid DNA (pDNA) complex を bear hold し た Atlantic わ さ び origin ペ ル オ キ シ ダ ー ゼ (HRP) enzyme reverse 応 に よ り don't melt し た gelatin ナ ノ フ ァ イ バ ー, (2) ア デ ノ with accompanying ウ イ ル ス (AAV) ベ ク タ ー を bear hold し た グ ル タ ル ア ル デ ヒ ド bridging the 応 に よ り don't melt し た gelatin ナ ノ フ ァ イ バ ー, (3) AAV ベ ク タ ー を bear hold し た ポ リ ジ オ キ サ ノ ン (PDS) フ ァ イ バ ー の open 発 に group take り ん だ. 1) で は, HRP enzyme 応 を with い て フ ェ ノ ー ル sexual water acid base (Ph) modified gelatin (gelatin - Ph) ナ ノ フ ァ イ バ ー を し melting, そ の の composite pDNA ナ ノ フ ァ イ バ ー surface へ の bear hold try を み た. Don't melt し た Gelatin - Ph ナ ノ フ ァ イ バ ー を pDNA complex を containing に む solution impregnation し た after, 処 し た Gelatin - Ph ナ ノ フ ァ イ バ ー で cell を culture on す る こ と で, but 伝 import や ゲ ノ compiling が ム may で あ る こ と を Ming ら か に し た. (2) で は, グ ル タ ル ア ル デ ヒ ド bridging the 応 に よ り don't melt し た gelatin ナ ノ フ ァ イ バ ー を ウ イ ル ス ベ ク タ ー で あ る AAV ベ ク タ ー を containing に む solution impregnation す る こ と で, ナ ノ フ ァ イ バ ー surface へ の AAV ベ ク タ ー の bear hold try を み た. 処 Richard し た ナ ノ フ ァ イ バ nurturing で ー し た cells に し seaborne て heritage 伝 son import が may で あ る こ と を confirm し た. さ ら に, マ ウ ス routine liver で の patch し た parts へ の field な of qualified 伝 child served が may で あ る こ と を Ming ら か に し た. (3) で は stitching, si と し て using さ れ て い る raw decomposability を hold つ polymer で あ る PDS か ら cropping し た PDS フ ァ イ バ ー に の surface, (2) と with others の way で AAV ベ ク タ ー を bear hold し た. (2) with others に, cultured cells and び マ ウ ス routine liver に え, マ ウ ス heart viscera で の heritage 伝 import and び ゲ ノ compiling が ム may で あ る こ と を Ming ら か に し た.

项目成果

Nonwoven Fabrics with Adeno-associated Viral Vector for Gene Local Delivery

用于基因局部传递的带有腺相关病毒载体的无纺布

• 发表时间: 2022
• 作者: Furuno Kotoko;Suzuki Keiichiro;Sakai Shinji
• 通讯作者: Sakai Shinji

Gelatin nanofiber mats with Lipofectamine/plasmid DNA complexes for in vitro genome editing

• DOI: 10.1016/j.colsurfb.2022.112561
• 发表时间: 2022-05-13
• 期刊: COLLOIDS AND SURFACES B-BIOINTERFACES
• 影响因子: 5.8
• 作者: Furuno, Kotoko;Suzuki, Keiichiro;Sakai, Shinji
• 通讯作者: Sakai, Shinji