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筋繊維芽細胞が有する血管新生促進作用の解析

肌成纤维细胞促血管生成作用分析

基本信息

批准号：
08876029
负责人：
守田昭仁
金额：
$ 0.96万
依托单位：
University of Shizuoka
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08876029/
关键词：
血管新生 VEGF 筋繊維芽細胞ラミニン増殖因子

项目摘要

ラット副睾丸周辺の脂肪組織から単離した筋繊維芽細胞(rat myofibroblast : rMf)を用いて以下の解析を行った。1.細胞外マトリックスの構成蛋白質ラミニンの分子種rMfは血管内皮細胞と同様な2種類のラミニンホモログを合成・分泌していることを確認し、報告した。2.既知の血管新生促進因子VEGF (Vascular Endothelium Growth Factor)の存在の確認(1) VEGF様蛋白質の検出rMfとヒトグリオブラストーマ細胞T98Gの培地及び細胞溶解液を非還元状態のSDS-PAGEに供し、4種類の抗VEGF抗体(免疫生物研究所製)を用いてVEGF様蛋白質の検出を試みた。抗体V-NとV-3はそれぞれVEGF165のN-端側とC-端側のペプチドを認識し、抗体16F2と2E1はリコンビナントVEGFを認識する。VEGFのダイマーは非還元状態では分子量46万前後に検出される。rMfとT98Gの場合、分子量が87KDaまたは200KDa前後の蛋白質バンドが検出されたことから、凝集体を形成している可能性が考えられた。次に、蛋白質を35Sで標識し、抗体を用いて免疫沈降した後、還元状態のSDS-PAGEに供した。rMfからはVEGF189、VEGF165、VEGF121と推定される蛋白質バンドが検出された。さらに、凝集しにくい条件でサンプルを調製し、還元状態でSDS-PAGEを行ったにも関わらず、およそ200KDaと高分子量の蛋白質が検出された。今後、この高分子量のVEGF様蛋白質の詳細な解析が必要である。(2) VEGF mRNAのPCRによる解析T98GとrMfから単離したポリ(A)+-RNAを用いてRT-PCRを行ったところ、500bp前後にPCR産物が検出された。今後の解析が必要である。

The following analysis was performed for rat myofibroblast : rMf. 1. The molecular species rMf, which constitute the extracellular protein, are identified in vascular endothelial cells. 2. Identification of VEGF (Vascular Endothelium Growth Factor):(1) Detection of VEGF protein in culture medium of T98G cells and SDS-PAGE of cell lysate in non-reduced state; Antibodies V-N and V-3 recognize the N-terminal and C-terminal sides of VEGF165, and antibodies 16F2 and 2E1 recognize VEGF. VEGF was found in a non-reactive state with a molecular weight of 460,000. In the case of rMf and T98G, the possibility of protein formation before and after molecular weight of 87KDa and 200KDa was examined. Next, protein 35S identification, antibody use, immunoprecipitation, SDS-PAGE of the status of the original rMf contains VEGF189, VEGF165, VEGF121 and putative proteins. In addition, the aggregation conditions were adjusted and SDS-PAGE was performed to detect proteins with high molecular weight of 200kDa. In the future, detailed analysis of VEGF protein with high molecular weight is necessary. (2)PCR analysis of VEGF mRNA T98G and rMf was performed using RT-PCR, and PCR products were detected before and after 500bp. Future analysis is necessary.