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新たに樹立した高分化胃壁細胞培養系を用いた壁細胞特異的発現遺伝子の解析

利用新建立的高度分化胃壁细胞培养系统分析壁细胞特异性表达基因

基本信息

批准号：
09877105
负责人：
譽田芳孝
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877105/
关键词：
壁細胞 SV40largeT抗原 H KATPase

项目摘要

壁細胞は胃腺を構成する細胞の一つである。A型萎縮性胃炎は、壁細胞上に特異的に存在するH-KATPaseのα・β各サブユニットに対する自己免疫的機序によって生じる。一方、壁細胞欠失トランスジェニックマウスでは、壁細胞欠失が他の胃粘膜構成細胞の発育障害を引き起こすことが報告された。これらの報告は、胃癌の前癌病変である萎縮性胃炎発症における壁細胞の関与を強く示唆するものである。これらの、冑粘膜萎縮機序の細胞・分子レベルでの研究には、高分化度、高純度の壁細胞の使用が不可欠であるが、従来、壁細胞研究に用いられてきた、単離胃腺、単離壁細胞、壁細胞初代培養系は、細胞の純度、分化度の面から、十分なモデルとはいいがたかった。そこで、申請者らは、高純度で操作性が良く高分化度を保った壁細胞培養系の作成を試みた。ラットH-KATPaseβサブユニットプロモーターの下流に、細胞不死化作用を持つ温度感受性SV40largeT抗原DNAを配したプラスミドを作成し、このプラスミドを導入したトランスジェニックマウスを得た。このトランスジェニックマウスから胃を摘出し、単離胃腺細胞を作製し、温度感受性SV401argeT抗原の許容温度である33°Cで培養することにより、長期間培養可能な、高分化度壁細胞培養系を得ようとしている。しかし、壁細胞のように、高度に分化した細胞を株化して継代することは、本法によっても容易ではなく、現時点では、長期にわたり、高度の分化度を維持する細胞系はまだ得られておらず、本研究の次の目標である壁細胞特異的に発現する遺伝子の同定は、あまり進捗していない。そこで、現在は、マウスヘの遺伝子の導入の段階から、すべての実験を再施行し、新たな壁細胞クローンを確立する努力を続けると同時に、比較的短時間のみ高分化度を維持しているクローンを用いて、壁細胞特異的に発現する遺伝子を同定する作業を進行させている。

The parietal cells are composed of gastric glands. Type A atrophic gastritis is characterized by the presence of specific H-K ATPase in parietal cells and the development of immune mechanisms. The development of gastric mucosa cells is impaired by the loss of one or more parietal cells. This report shows that gastric cancer is related to the development of parietal cells. In the study of cellular and molecular mechanisms of gastric mucosa atrophy, the use of high differentiation and high purity parietal cells is indispensable. In the study of parietal cells, the use of isolated gastric glands, isolated parietal cells, primary culture lines of parietal cells, cell purity and differentiation are essential. High purity, operability, high differentiation, and preparation of cell culture lines. H-K ATPase β-cell inactivation is carried out in the downstream of SV40 largeT antigen DNA. The DNA is prepared and introduced into the downstream of SV40 largeT antigen. The temperature sensitivity of SV401 argeT antigen is 33 ° C. The culture temperature of SV401 argeT antigen is 33°C. The culture temperature of SV401 argeT antigen is 33°C. The culture temperature of SV401 argeT antigen is 33 ° C. Cell lines that are easy to differentiate, present, long-term, and highly differentiated are obtained. The purpose of this study is to identify and identify cells that are specific to parietal cells. In addition, we are now re-implementing the phase change and implementation of the gene introduction process, and making efforts to establish new parietal cells. At the same time, we are conducting the same process to maintain the high differentiation degree in a relatively short period of time.