Naked DNA Injectionによる表皮細胞への遺伝子導入法の開発

开发通过裸DNA注射将基因导入表皮细胞的方法

• 批准号: 09877162
• 负责人: 谷川 瑛子
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877162/
• 关键词: 遺伝子治療; Naked DNA injection; 蛋白発現; 表皮細胞; 器官培養; 皮膚; 発現ベクター

本研究の目的は、器官培養されたヒト皮膚へプラスミド発現ベクターをNaked DNAの形で皮下注し、表皮細胞での発現動態を解析し、表皮細胞への効率の良い遺伝子導入法を開発することにある。本研究により、Naked DNA Injection法の確立のために必要な試薬、遺伝子、ベクターを作成した。外来性遺伝子の発現動態を検討するために、その発現を簡便に発色剤を用いて検討できるガラクトシダーゼ遺伝子を発現するベクターを用意した。ガラクトシダーゼ遺伝子の発現レベル及び発現部位を、凍結切片を用いて免疫組織学的に検討した結果、ガラクトシダーゼは、注入後2時間から48時間まで発現が認められ、表皮ほぼ全層にわたり発現していることが確認された。さらに、表皮構成成分で細胞膜蛋白であるデスモグレイン3(Dsg3)を欠損させたDsg3ノックアウトマウスを遺伝性皮膚疾患のモデルマウスとして使用した。このマウスは、細胞間接着分子であるDsg3が欠損しているために、口腔内における水疱・びらんの形成、ならびに休止期(telogen)にある被毛の脱毛を生じる。このマウスに対する遺伝子治療として、発現ペクターに組み込んだマウスDsg3cDNAを表皮細胞にNaked DNA injection法により導入した。導入された遺伝子が、表皮ならびに毛嚢において発現されることを蛍光染色法にて確認した。外来Dsg3の発現により、表現型を元に戻すことは確認できなかった。さらに、外来Dsg3に対する抗体産生が、Naked DNA injection後1、2ヶ月で誘導されることを確認した。本研究により、表皮に対するNaked DNA injection法による遺伝子導入法が実現可能であることが示されたと同時に、導入した遺伝子産物による免疫反応が遺伝子治療実施の際の障害になることが確認された。従って、遺伝子治療における外来遺伝子産物に対する免疫寛容誘導法の開発が必要であることが示唆され、新たなる研究テーマの開拓となった。

The purpose of this study is: organ culture, skin culture, and organ culture. The shape of DNA is injected subcutaneously, the dynamic expression of epidermal cells is analyzed, and the efficiency of epidermal cells is improved by the introduction method of subcutaneous injection. This research was carried out and the Naked DNA Injection method was established and it was necessary to test the method and make the test. Exogenous inheritance of the child's appearance is dynamic and simple.いて検问できるガラクトシダーゼ伝子を発出入するベクターを意した. The results of the ガラクトシダーゼ弝子の発 appear and the び発appearance partを, frozen sections and いて immunohistology, ガラクトシダーゼは, 2 hours after injection, 48 hours, まで発appears and recognizes められ, epidermis ほぼfull thickness, にわたり発appears, していることがconfirms された.さらに, epidermal component and cell membrane protein であるデスモグレイン3(Dsg3)をdeficiencyさせたDsg3 ノックアウトマウスをLegendary skin disease のモデルマウスとして use した.このマウスは, intercellular linker molecule であるDsg3 がloss しているために, intraoral におけるThe formation of blisters, the formation of telogen, the hair removal of hair, and the growth of telogen.このマウスに対する伝子treatmentとして、発 appearペクターに集团み込んだマウスDsg3cDNAをepidermal cellsにNaked DNA The injection method is easy to introduce. Introduce された缝子が, epidermis ならびに毛嚢において発行されることを蛍optical staining method にてconfirmationした. Alien Dsg3's appearance is revealed, and the phenotype of the alien Dsg3 is confirmed. The production of foreign Dsg3 antibodies was confirmed, and the induction was confirmed 1 or 2 months after Naked DNA injection. This study is based on Naked DNA of the epidermis Injection method is possible, and it is possible to introduce the injection method at the same time. Enter the product of した缝子product によるimmune reaction 応が缝子treatment実事のinteriorのobstacle になることがconfirmされた.従って、缝子treatmentにおけるForeign 缝子productsに対するimmune tolerance induction methodのIt is necessary to open a new window, to open a new window, to open a new window and to open a new window.

项目成果

Shirakata Y,et al: "Lack of mucosal in volvement in pempbiqus tolliaceus may be due to low expression of desnioplein" J Invest Dermatal. 110. 76-78 (1998)

Shirakata Y 等人：“pempbiqus tolliaceus 缺乏粘膜参与可能是由于 desnioplein 的低表达”J Invest Dermatal。

Ishii K et al: "Characterization of Aufoaurfiboolies in pewplugus using aufigew specific FLISAs with baculoiozus expressed rewdbau dissuglessis" J Immunal. 59. 2010-2017 (1997)

Ishii K 等人：“使用 aufigew 特异性 FLISA 和杆状病毒表达的 rewdbau dissuglessis 对 pewplugus 中的 Aufoaurfiboolies 进行表征”J Immunal。

Akiyama M,Amagai M,Smith LT,Hashimoto K,Shimizu H,Nishikawa T: "Epimorphin expression during human fetal hair follicle development" Br J Dermatol. (in press). (1999)

Akiyama M、Amagai M、Smith LT、Hashimoto K、Shimizu H、Nishikawa T：“人类胎儿毛囊发育过程中的表吗啡表达”Br J Dermatol。

Proby C, Fujii Y, Owaribe K, Nishikawa T, Amagai M: "Human autoantibodies against HD1/plectin in paraneoplastic pemphigus" J Invest Dermatol. 112. 153-156 (1999)

Proby C、Fujii Y、Owaribe K、Nishikawa T、Amagai M：“副肿瘤性天疱疮中针对 HD1/plectin 的人类自身抗体”J Invest Dermatol。

Ishii K, Amagai M, Komai A, Ebihara T, Chorzelski TP, Jablonska S, Ohya K, Nishikawa T, Hashimoto T: "Desmoglein 1 and desmoglein 3 are the target autoantigens in herpetiform pemphigus" Arch Dermatol. (in press). (1999)

Ishii K、Amagai M、Komai A、Ebihara T、Chorzelski TP、Jablonska S、Ohya K、Nishikawa T、Hashimoto T：“桥粒芯糖蛋白 1 和桥粒芯糖蛋白 3 是疱疹样天疱疮的目标自身抗原”Arch Dermatol。