新しい二次元電気泳動ゲル解析法による胃癌,大腸癌に関与する未知なる遺伝子の解明

使用新的二维电泳凝胶分析方法阐明与胃癌和结直肠癌相关的未知基因

• 批准号: 09877249
• 负责人: 板野 理
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877249/
• 关键词: RLGS; ゲノム解析; クローニング; 未知遺伝子; 大腸癌; 大腸癌関連遺伝子; PCR; ヒト脂肪酸シンターゼ

現在、胃癌に先行して、大腸癌の臨床検体を用いた研究を継続中である。大腸癌新鮮手術切除検体25例の癌部、非癌部のゲノムDNAを抽出し、RLGS法を用いて、各々のprofileを作成した。(板野、斎藤)二次元電気泳動により得られた各profile上でのスポットの変化を、癌部と非癌部間で比較したところ、いくつかの共通スポット変化をみとめた。その内訳は、非癌部のみに出現するスポットが4種、癌部のみに出現するスポットが2種であった。最も高頻度にみられたスポット変化は癌部のみに出現するスポットで、25例中19例(76%)にみとめた。そのDNA断片をゲルからクローニングするために、制限醇素Not I siteのみを描出するtrapper methodを用いた。クローニングはtrapper施行後のprofileから、目的とするスポットを直接打抜き、DNAを抽出した。DNA量の確保のため、プラスミドに押入し、大腸菌を用いて形質転換を行い、増幅させた。さらにダイデオキシ法にて、塩基配列を決定した。今回のクローニングで得られたDNA断片の塩基配列は、ヒト脂肪酸合成酵素遺伝子(FAS)と69%の相同性を認めるものであった。(板野)今後は,得られたDNA断片をprobeとし、該当する癌関連遺伝子の同定を試みる予定である。以上の手法にて、他の変化スポットも1種ずつクローニングしてゆくことで、未知の癌関連遺伝子同定が進んでゆくと考える。また、各profile間のスポット変化と臨床病理学的特徴を解析することで、特定の遺伝子変化に対応した病態が解明される可能性がある。

At present, gastric cancer is in advance, large cancer is in bed, and the body is used in the study. In 25 patients with large breast cancer, the cancer part and non-cancer part were treated with DNA extraction, the RLGS method was used to make the tumor, and the profile was used to make the tumor. (Banye, Yoto) two-dimensional electrophoretic swimming is successful. On each profile, the cancer and the non-cancer parts of the cancer department are more sensitive than each other. Four kinds of anti-cancer drugs were found in the domestic and non-cancer departments, and two were found in the cancer department. The most severe disease was found in the cancer department. 19 of the 25 cases (76%) had abnormal symptoms. DNA fragments, trapper method fragments, glycyrrhizin, glycyrrhizin, and so on. After the implementation of trapper, you will find that you need to profile your phone, and your goal is to call your phone directly and DNA to pull out your phone. DNA makes sure that you have to check in, check in, and use the shape and size of the fungus to make sure that you do not want to pay. Please tell me that the method and the basis of the column are determined. This time, we got the DNA fragments, the base alignment, the fatty acid synthesis enzyme (FAS), the 69% homology. (Banye) from now on, the DNA fragments should be probe, and the link between the cancer and the cancer should be the same as that of the doctor. The above methods are used to determine whether or not one type of cancer link is the same as that of the unknown cancer link. The characteristics of the pathology of each profile were analyzed, and the specific symptoms of the disease were explained.