ヒト脳腫瘍におけるサイクリンGの発現と予後判定及びそのアンチセンス治療の試み

细胞周期蛋白G在人脑肿瘤中的表达和预后以及反义治疗的尝试

• 批准号: 09877270
• 负责人: 清水 恵司
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877270/
• 关键词: Glioma; Cyclin; Cyclin G; Antisence; Apoptosis; Gene transfer; HVJ-liposome; Gene therapy; CyclinG; HVJ-Iiposome

高等真核細胞におけるサイクリンとしては、現在までにAからIまでの9種類のサイタリンが報告されており、その中でサイクリンGは、当教室の田村によって発見されたものである(Oncogene8:2113-2118,1993)。このサイクリンGがP53と結合すること、アンチセンスの導入により細胞にアポトーシスを誘導すること、さらに悪性神経膠芽腫細胞株にサイクリンGが高発現していることも実証している(未発表データ)。本研究では、サイクリンGが、脳腫瘍の発症にどのように関与しているか調べると共に、脳腫瘍の発生メカニズムに関与している他のサイクリンの有無や、サイタリン様蛋白質の存在の可能性について解析した。今のところサイクリンGに対する有用な抗体が入手出来ないので、本サイクリンを発現している細胞を選別するのが困難であった。最近GFP(green fluorescent protein)を付加したり、FlagでTag付けすることにより、サイクリンGもしくはアンチセンスを発現した細胞を容易に識別できる可能性が見込まれるようになった。そこで、種々のグリオーマ細胞に、GFP融合サイクリンGやFlag標識サイクリンGコンストラクトの過剰発現を試みたが、サイクリンGの過剰発現が細胞毒性を有するためか、十分な蛍光光度を有する細胞もしくは坑F聴抗体に反応する細胞を入手する事は出来なかった。また、アンチセンスRNA発現細胞株をクローニングする目的で、GFP融合アンチセンスサイクリンGの過剰発現も試みたが、同様に入手不可能であった。一方、グリオーマ細胞に対するサイクリンGのアンチセンスオリゴによる治療効果は、Sオリゴ自体の毒性のためにセンスオリゴ投与との間に有意差を見出せなかった。その結果、マウス神経膠芽腫モデルは容易に作製可能であるが、in vitroでの条件設定ができない現状でのin vivo治療実験は施行していない。また、神経膠芽腫細胞株、髄芽腫細胞林、あるいは神経芽腫細胞株よりRNAを抽出し、変性プライマーを用いたRT-PCRにより、サイクリンファミリーの解析を行ったが、既存のG1、G2、Iサイクリン以外の新たなサイタリンはクローニングできなかった。現在、高力価レトロウイルスにサイクリンGのセンス及びアンチセンスを導入したベクターを用いて、これら遺伝子発現細胞株の樹立を試みている。

Higher eukaryotic cells に お け る サ イ ク リ ン と し て は, now ま で に A か ら I ま で の 9 kinds の サ イ タ リ ン が report さ れ て お り, そ の in で サ イ ク リ ン G は, when the classroom の tamura に よ っ て 発 see さ れ た も の で あ る (Oncogene8:3, 2113-2118199). こ の サ イ ク リ ン G が P53 と combining す る こ と, ア ン チ セ ン ス の import に よ り cells に ア ポ ト ー シ ス を induced す る こ と, さ ら に 悪 sex god 経 rubber buds swell cell lines に サ イ ク リ ン high G が 発 now し て い る こ と も card be し て い る (not 発 デ ー タ). This study で は, サ イ ク リ ン G が, 脳 swollen sores の 発 disease に ど の よ う に masato and し て い る か adjustable べ る と に, 脳 swollen sores の 発 raw メ カ ニ ズ ム に masato and し て い る he の サ イ ク リ ン の や, サ イ タ リ ン there are others in protein の の possibilities に つ い て parsing し た. Today の と こ ろ サ イ ク リ ン G に す seaborne る が な antibody of out useful な い の で, this サ イ ク リ ン を 発 now し て い を る cells seeding す る の が difficult で あ っ た. Recently GFP (green fluorescent protein) を plus し た り, Flag で Tag pay け す る こ と に よ り, サ イ ク リ ン G も し く は ア ン チ セ ン ス を 発 now し た を に easily recognize で き る が likely see 込 ま れ る よ う に な っ た. そ こ で, kind of 々 の グ リ オ ー に マ cells, GFP fusion サ イ ク リ ン G や Flag logo サ イ ク リ ン G コ ン ス ト ラ ク ト の before turning 発 を now try み た が, サ イ ク リ ン G の before turning 発 now が cytotoxicity を have す る た め か, very な 蛍 light luminosity を have す る cells も し く は pit F に 聴 antibody against 応 す る cells with を す は る things Youdaoplaceholder0 った. ま た, ア ン チ セ ン ス RNA 発 now cell lines を ク ロ ー ニ ン グ す る purpose で, GFP fusion ア ン チ セ ン ス サ イ ク リ ン G の before turning 発 も now try み た が, with others in に of impossible で あ っ た. Party, グ リ オ ー マ cells に す seaborne る サ イ ク リ ン G の ア ン チ セ ン ス オ リ ゴ に よ る treatment services fruit は, S オ リ ゴ autologous の toxicity の た め に セ ン ス オ リ ゴ cast with と の に between poor を see that せ な か っ た. そ の results, マ ウ ス god 経 rubber buds swell モ デ ル は easy に cropping could で あ る が, the in vitro で の conditions set が で き な い status quo で の in vivo treatment be 験 は imposed し て い な い. ま た, god 経 plastic buds swell cell lines, marrow buds swell cell Lin, あ る い は god 経 buds swell cell lines よ を り RNA extraction し, - プ ラ イ マ ー を with い た rt-pcr に よ り, サ イ ク リ ン フ ァ ミ リ ー の parsing line を っ た が, existing の G1, G2, I サ イ ク リ ン outside の new た な サ イ タ リ ン は ク ロ ー ニ ン グ で き な か っ た. Now, high strength 価 レ ト ロ ウ イ ル ス に サ イ ク リ ン G の セ ン ス and び ア ン チ セ ン ス を import し た ベ ク タ ー を with い て, こ れ ら heritage 伝 son 発 now try cell lines の establish を み て い る.

项目成果

Park KC: "Regulation of interferon responses in medulloblastoma cells by interferon regulatory factor -1 and -2." Br J Cancer. (in press). (1998)

Park KC：“干扰素调节因子 -1 和 -2 调节髓母细胞瘤细胞中的干扰素反应。”

Moriuchi S: "Decreased N-myc expression in human medulloblastoma cell lines during differentiation." Anticancer Res. 17. 301-306 (1997)

Moriuchi S：“人髓母细胞瘤细胞系在分化过程中 N-myc 表达降低。”

Yamada M: "In vitro study on intrathecal use of 5-fluoro-2'-deoxyuridine (FdUrd) for meningeal dissemination of malignant brain tumors." J Neuro-oncol. (in press). (1998)

Yamada M：“鞘内使用 5-氟-2-脱氧尿苷 (FdUrd) 治疗恶性脑肿瘤脑膜播散的体外研究。”

Mabuchi E: "Gene delivery by HVJ-liposome in the experimental gene therapy of murine glioma." Gene Ther. 4(8). 768-772 (1997)

Mabuchi E：“在小鼠神经胶质瘤的实验性基因治疗中通过 HVJ 脂质体进行基因传递。”

Park KC: "Interferon yield MHC antigen expression of human medulloblastoma cells and its suppression during dibutyryl cyclic AMP-induced differentiation :" Cell Mol Neurobiol. (in press). (1998)

Park KC：“干扰素产生人髓母细胞瘤细胞的 MHC 抗原表达及其在二丁酰环 AMP 诱导的分化过程中的抑制：”Cell Mol Neurobiol。