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細胞増殖抑制因子としてのGnRH生理活性の発現機構に関する研究

GnRH作为细胞增殖抑制剂的生理活性表达机制研究

基本信息

批准号：
09874173
负责人：
朴民根
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09874173/
关键词：
GnRH GnRH受容体閉鎖卵胞下垂体生殖腺副腎細胞増殖抑制因子分化

项目摘要

細胞増殖抑制因子としてのGnRHの生理活性の発現機構を解明する本研究の目的を達成するために、平成10年度に以下の実験を行った。1. GnRHによる細胞増殖抑制機構の解析:(1) GnRH受容体の第一番目の細胞質ドメインにある塩基性アミノ酸の長い配列の機能を解明するため、このドメインを蛍光タンパク質に融合させ、COS-1細胞に発現させた。その結果、蛍光物質が細胞の核に多く局在されることが分かった。現在この融合タンパク質を持続的に発現する細胞をCHO細胞株を用いて作成中である。引き続き、この細胞における細胞質から核内への核タンパク質の輸送能を調べ、受容体の第一番目の細胞質ドメインとGnRHの細胞増殖抑制活性との関係を究明する。(2) CHO細胞株を用いてGnRH受容体の発現を自由に調節できるた細胞株を作成している。現在、発現誘導薬剤への反応が高い細胞株をクローン化している。今後、この細胞株を用いてGnRH受容体発現量と細胞増殖率との関系を調べる。2. GnRHの産生部位の特定とその意義:(1) 卵巣でのGnRH受容体の発現:周生期のラット卵巣でのGnRH受容体の発現をin situハイブリダイゼーションで調べた。その結果、周生期の卵巣においても退行中の卵胞に強い発現が見られた。一方、間質細胞でも強い発現が見られ、退行した卵胞が間質細胞化する過程でのGnRHの役割が示唆された。(2) 精巣でのGnRH受容体の発現:精巣を腹内に停留させたときのGnRH受容体の発現変化を調べた。その結果、精子形成が抑制されるとGnRH受容体の発現が増加していることを定量的PCRを用いて明らかにした。(3) 副腎でのGnRH受容体の発現:副腎のどの部位でGnRH受容体が発現しているかをin situハイブリダイゼーションで調べた。その結果、ラットの副腎皮質からGnRH受容体の発現が検出された。しかし、皮質のどの細胞が主に発現するかは判別できず、もっと感度のよい検出法を利用し、副腎でのGnRHの生理機能を引き続き究明している。

To clarify the mechanism of expression of GnRH, the aim of this study was to achieve the following goals: 1. The analysis of GnRH cell proliferation inhibition mechanism:(1) GnRH receptor in the first phase of the cytoplasmic membrane, the basic amino acid long chain of the function of the understanding, this membrane, the protein fusion, COS-1 cell development. The result is that the nucleus of the cell is divided into two parts. Now the fusion protein is produced by CHO cell lines. To investigate the relationship between GnRH cytosol, nuclear cytosol transport, receptor cytosol and GnRH proliferation inhibitory activity. (2)CHO cell lines were constructed using GnRH receptors that were freely regulated. Now, the development of induction agents and the development of high-level cell lines. In the future, the relationship between GnRH receptor production and cell proliferation will be adjusted by using these cell lines. 2. The specific significance of the site where GnRH is produced is as follows:(1) The appearance of GnRH receptor in the egg: The appearance of GnRH receptor in the egg during the perinatal period is regulated in the situation. The results of the cycle of development of the egg, the development of the egg in the process of retrogression, and the emergence of the egg in the process of development. The cells of one side and the stroma are strongly developed, and the cells of one side and the stroma are retrogressed. (2)The expression of GnRH receptor: The expression of GnRH receptor is modulated by the concentration of GnRH. As a result, spermatogenesis was inhibited and GnRH receptor production increased. Quantitative PCR was used to detect the presence of GnRH receptor. (3)GnRH receptor development in accessory kidney: GnRH receptor development in accessory kidney The results showed that GnRH receptor was detected in the adrenal cortex. The physiological function of GnRH in the adrenal cortex and adrenal cortex is studied by means of differential diagnosis, sensitivity detection and evaluation.