DNAコンジュゲートによるワンポット・アフィニティー分離

使用 DNA 缀合物进行一锅亲和分离

基本信息

  • 批准号:
    09875204
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.41万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Exploratory Research
  • 财政年份:
    1997
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1997 至 1998
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

感熱特性を有するDNAコンジュゲートを利用し、クロマトグラフィー形式でなく一本のサンプルチューブの中で、生理温度付近でわずかに熱を加えるだけで、ワンポットでDNA結合性物質を沈殿分離するシステムを構築することを目的とした。その結果、DNA結合性タンパク質の分離精製ならびにインターカレート性発ガン物質の分離除去について、実用化に結びつけるための基礎的データを得ることができた。まず、末端にDNA結合性官能基をもつテレケリックポリマーの合成法を確立した。ポリ(N一イソプロピルアクリルアミド)の合成に連鎖移動重合の手法を用いることにより、高分子鎖末端にカルボキシル基を導入し、DNA二重らせんに光結合することの知られるソラレンと、エチレンジアミンタイプのスペ-サを介して結合させた。一方、DNAとしてプラスミドpBR322を用い、これに上記の感熱性ポリマーをグラフト重合した。これを用いて、制限酵素EcoRIのアフィニティー分離が可能であることを明らかにした。これにより、ここで合成したDNAコンジュゲートが、特定の遺伝調節タンパク質(それらの多くは特定のDNA塩基配列に特異的に結合する)の精密分離に有望であることが示された。また、同様に合成されたDNAコンジュゲートを用い、エチジウムの水溶液から同色素の沈殿分離が可能であることも証明した。エチジウムは典型的なDNA結合性色素として知られる一方、極めて強力な発ガン性物質であって、この実験は環境水中からの発ガン性物質の簡易除去・定量法の基礎として重要である。
Thermosensitive properties of DNA binding substances are used in the form of DNA binding substances, in the form of DNA binding substances. As a result, DNA binding properties are separated and purified, and the separation and removal of DNA binding properties are carried out. A synthetic method for the synthesis of terminal DNA binding functional groups was established. When the method of chain movement superposition is used in the synthesis of poly (N-type polymer), the kallikyl group is introduced into the end of the polymer lock, and the DNA duplex is photo-combined, the select-support of the Echranjima protein is combined. A side, DNA, and pBR322 are used, and the heat sensitivity is recorded. This is the first time I've ever been able to use EcoRI. This synthesis of DNA molecules is expected to result in precise isolation of specific DNA molecules (e.g., multiple DNA molecules). It is possible to separate the same pigment from the same aqueous solution. A simple method for the determination of DNA-binding pigments in environmental water is essential.

项目成果

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专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Daisuke UMENO: "Poly(N-isopropylacrylamide)Carrying Double-Stranded DNA for Affiinity Separation of Genotoxins" Analytical Science. 13. 553-556 (1997)
Daisuke UMENO:“携带双链 DNA 的聚(N-异丙基丙烯酰胺)用于基因毒素的亲和分离”分析科学。
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  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
梅野太輔: "機能性DNAの合成と応用 〜DNAハイブリッドの化学を中心に〜" 高分子. 46・5. 314-318 (1997)
梅野大辅:“功能性DNA的合成和应用〜关注DNA杂交体的化学〜”聚合物46・5(1997)。
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中村 瞳其他文献

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