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原虫病に対する組み換えワクチンの開発に関する基礎研究

原虫病重组疫苗研制的基础研究

基本信息

批准号：
09876078
负责人：
大塚治城
金额：
$ 0.32万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

リーシュマニア原虫は、WHOによって、熱帯および亜熱帯地域における六大感染症の一つに指定されている人獣共通感染症であるリーシュマニア症を引き起こす。リーシュマニア原虫の感染防御には、感染初期におけるTh-1によるマクロファージの活性化、および原虫由来抗原による持続免疫の重要性が指摘されている。組み替えウイルスワクチンは、抗原の持続的な発現を行う上で有効な手段であると考えられている。今回我々は、L.donovaniのLACK cDNAを組み込んだ組み換えワクシニアウイルスを構築し、組み換えワクシニアウイルス感染細胞でのLACK蛋白質の発現をin vitroで確認した。「材料と方法」L.donovani LACK cDNAの蛋白質コード領域を、ワクシニアウイルスのThymidine kinase遺伝子およびその中心に挿入されたワクシニアウイルスp7.5 promoterを持つ発現カセットを含むpAK8プラスミドのSaΛ siteに組み込み、弱毒株であるワクシニアウイルスLc16m0株を用いた相同組み換えによって、LACK cDNAが組み込まれた組み換えワクシニアウイルス(reVV/LACK)を作出した。また、GST Gene Fusion Systemを用いて大腸菌により組み換えLACK蛋白質を発現させ、この組み換えLACK蛋白質を抗原としてマウスに腹腔免疫することによって、抗LACK抗血清を調製した。得られた抗血清の免疫特異性をL.donovaniおよびL.amazonensis虫体を抗原として用いた蛍光抗体法、およびwestern blotting法により確認した。また、reVV/LACK感染細胞におけるLACK蛋白質の産生をweatern blotting法により確認した。「結果および考察」L.donovaniおよびL.amazonensis虫体を抗原として用いた蛍光抗体法により、LACK蛋白質が原虫細胞内に顆粒状に認められた。また、western blotting解折の結果、LACK蛋白質の分子量は、約33kDaであった。一方、reVV/LACK感染細胞を抗原としたwestern blotting解析によって、感染細胞内で、LACK蛋白質が産生されていること、およびその分子量が原虫由来のLACK蛋白質と同様に約33kDaであることが示された。以上のことから、組み換えワクシニアウイルスにより動物細胞内でLACK蛋白質が発現されること、さらに組み換えLACK蛋白質、リーシュマニア原虫内のLACK蛋白質およびreVV/LACKによって産生されるLACK蛋白質が同様の抗原性を保持していることが示唆された。

The six major infectious diseases are identified by WHO, WHO, WHO and WHO. The importance of immunity to protozoan infection is discussed in terms of the activation of protozoan antigens in the early stages of infection. There are several ways to prevent the occurrence of antigen-related diseases. The expression of LACK protein in L.donovani infected cells was confirmed in vitro. "Materials and Methods" L.donovani LACK cDNA protein domain, Thymidine kinase gene, and the center of the protein domain, and the center of the center The LACK cDNA is composed of two parts: one part is composed of three parts: one part is composed of three parts: one part is composed of four parts: The GST Gene Fusion System is used to produce LACK protein from Escherichia coli, to produce LACK protein antigen from Escherichia coli, and to prepare anti-LACK antiserum. The antisera were identified by Western blotting and Western blotting. The production of LACK protein in reVV/LACK infected cells was confirmed by western blotting. L.donovani, L. amazonensis, L.amazonensis, L.donovani, L.amazonensis, L. amazonensis, L. donovani, L. amazonensis, L. amazonensis, L. The molecular weight of LACK protein is about 33kDa. A protein of about 33kDa was produced in infected cells and its molecular weight was determined by Western blotting analysis. LACK protein is produced in animal cells and its antigenicity is maintained.