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平滑筋細胞に発現するbHLH遺伝子の検索

寻找平滑肌细胞中表达的 bHLH 基因

基本信息

批准号：
08770062
负责人：
大見和宏
金额：
$ 0.64万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08770062/
关键词：
平滑筋分化制御 bHLH クローニング

项目摘要

平滑筋細胞の分化制御機構解明を目標に、私は平滑筋としての分化形質を有する培養株化細胞の開発に成功した。本研究ではこの細胞を利用して種々の細胞分化調節遺伝子構造の中に共通に見い出されるbHLH配列を有する遺伝子の検索を行った。*成果1bHLH遺伝子検索用プローブの作製2平滑筋の分化形質を有する培養株化細胞を用いてのcDNA遺伝子ライブラリー作製株化細胞からオリゴ(dt)セルロースカラムによるmRNAの調製、mRNAからGubler&Hoffmannの方法に従いcDNAの合成、ラムだgt11ベクターへの連結、パッケージングの過程を経てcDNAライブラリーを作製した。3bHLH遺伝子検索用プローブの標識及びcDNAライブラリーのスクリーニング1で作製したプローブをランダムプライム法を用いて蛍光標識をし、2で作製したライブラリーのファージを大腸菌に感染させ寒天培地上にプラークを形成させた。各々のプラークDNAをニトロセルロース膜へと転写した。標識プローブとハイブリダイゼーションを行った。4目的遺伝子のクローニングとBluescriptベクターへのサブクローニング3で反応が得られたプラークのDNAを用いたサザンプロット法により、bHLH構造を含むことが確認されたクローンのみを用いて同様に二次、三次スクリーニングを行った。そしてクローニングされた各cDNAクローンをBluescriptベクターにサブクローニングした。以上のように平成8年度の本研究でbHLH遺伝子のクローニングに成功した。今後はこの遺伝子の構造、機能の解析を進める。

The differentiation control mechanism of smooth muscle cells was clarified, and the differentiation characteristics of smooth muscle cells were successfully developed. In this study, we identified common genes for the regulation of cell differentiation in these cells and their utilization. Results 1b HLH gene expression for the implementation of the gene expression system 2 smooth muscle differentiation of the quality of culture cells using the cDNA gene expression system for the production of cultured cells from the gene expression system Gubler&Hoffmann's method for gene expression system mRNA modulation, gene expression system cDNA synthesis, gene expression system linkage, gene expression process cycle cDNA production. 3bHLH gene expression uses the logo and cDNA to identify the gene expression. 1. It is controlled by the logo and cDNA expression method. 2. It is controlled by the logo and cDNA expression method. 3. It is controlled by the gene expression method. All kinds of things are different. The best way to do this is to get rid of it. 4. The target gene was identified by the Bluescript, and the target gene was identified by the Bluescript. 3. The target gene was identified by the Bluescript, and the target gene was identified by the Bluescript. All the cDNA fragments are recorded in Bluescript. This study was conducted successfully in Heisei 8. In the future, the structure and function of the genetic material will be analyzed.