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酵母転写系を利用したSLG及びSRK結合因子の探索

使用酵母转录系统搜索 SLG 和 SRK 结合因子

基本信息

批准号：
08760005
负责人：
渡辺正夫
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

アブラナ科植物の自家不和合性認識機構を解明を目的として、雌しべ側の認識物質であるSLG (S-locus glycoprotein), SRK (S-receptor kinase)と相互作用する花粉、柱頭側の遺伝子を、酵母を使ったTwo-hybrid systemで、単離することを計画した。まず、レセプター型のprotein kinaseをコードしているSRKのkinase domainをプラスミドベクターpVP16, pBTM116に読み枠があうようにクローニングした。また、分泌型のSLGのシグナルペプチドを除いた部分を、同様にクローニングした。それぞれの遺伝子の2種類のプラスミドを、酵母(L40)に形質転換し、-Leu/Trpの培地にまいた。両方のプラスミドを有している酵母について、その相互作用を調べるために、-Leu/Trp/-Hisの培地に継代し、バックグラウンドとして発現しているHisの発現を阻害する2-ATを加えた。SLG9をそれぞれのベクターにクローニングしたものを形質転換した酵母では、-Leu/Trp/-Hisの培地の生育は観察されなかった。一方、SRK-kinase domainをクローニングしたプラスミド相互では、わずかながら、酵母の生育が見られ、相互作用があるものと判断できた。SLGを組み込んだ酵母においてタンパク質の発現を電気泳動によって調べたところ、発現は確認されなかった。このことから、SLG相互作用が検出できなかった一因であると考えられた。pBTM116-SLGをbait(えさ)として、花粉で発現している相互作用する遺伝子の探索を目的として、1核期葯cDNAライブラリーを作製した。同様に、pBTM116-SRK-KDをbaitとして、柱頭中での相互作用する遺伝子探索のために、cDNAライブラリーを作製した。現在、作製した柱頭cDNAライブラリーをpVP16にライゲーションし、相互作用のある遺伝子を探索中である。

A Two-hybrid system of pollen, stigma and yeast is planned for the understanding of the identity and sexual recognition mechanism of the plants in the family Blaceae, including the interaction of SLG (S-locus glycoprotein) and SRK (S-receptor kinase) with each other. The protein kinase domain of SRK is changed from pVP16 to pBTM116. In addition to the above, the secreting SLG is also classified into two categories: There are two kinds of yeast, yeast (L40), morphological change, -Leu/Trp and culture medium. 2-AT is added to inhibit the development of yeast and its interaction with-Leu/Trp/-His culture. SLG9 is the most important part of the culture. It is the most important part of the culture. One side, SRK-kinase domain, interaction, interaction, judgment, etc. The SLG is composed of two parts: one part is composed of two parts, the other part is composed of two parts. The interaction between SLG and SLG is caused by the interaction between SLG and SLG. pBTM116-SLG baits (), pollen development, and interaction with the gene. pBTM116-SRK-KD baits, interactions in stigma, gene discovery, cDNA translation Now, we are exploring the interaction between the two genes.