酵母転写系を利用したSLG及びSRK結合因子の探索

使用酵母转录系统搜索 SLG 和 SRK 结合因子

• 批准号: 08760005
• 负责人: 渡辺 正夫
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08760005/
• 关键词: アブラナ科植物; 自家不和合性; SLG; SRK; タンパク質相互作用; 花粉側因子; 酵母; 認識機構

アブラナ科植物の自家不和合性認識機構を解明を目的として、雌しべ側の認識物質であるSLG (S-locus glycoprotein), SRK (S-receptor kinase)と相互作用する花粉、柱頭側の遺伝子を、酵母を使ったTwo-hybrid systemで、単離することを計画した。まず、レセプター型のprotein kinaseをコードしているSRKのkinase domainをプラスミドベクターpVP16, pBTM116に読み枠があうようにクローニングした。また、分泌型のSLGのシグナルペプチドを除いた部分を、同様にクローニングした。それぞれの遺伝子の2種類のプラスミドを、酵母(L40)に形質転換し、-Leu/Trpの培地にまいた。両方のプラスミドを有している酵母について、その相互作用を調べるために、-Leu/Trp/-Hisの培地に継代し、バックグラウンドとして発現しているHisの発現を阻害する2-ATを加えた。SLG9をそれぞれのベクターにクローニングしたものを形質転換した酵母では、-Leu/Trp/-Hisの培地の生育は観察されなかった。一方、SRK-kinase domainをクローニングしたプラスミド相互では、わずかながら、酵母の生育が見られ、相互作用があるものと判断できた。SLGを組み込んだ酵母においてタンパク質の発現を電気泳動によって調べたところ、発現は確認されなかった。このことから、SLG相互作用が検出できなかった一因であると考えられた。pBTM116-SLGをbait(えさ)として、花粉で発現している相互作用する遺伝子の探索を目的として、1核期葯cDNAライブラリーを作製した。同様に、pBTM116-SRK-KDをbaitとして、柱頭中での相互作用する遺伝子探索のために、cDNAライブラリーを作製した。現在、作製した柱頭cDNAライブラリーをpVP16にライゲーションし、相互作用のある遺伝子を探索中である。

In order to understand the incompatibility of the plant family, the family is responsible for the understanding of the purpose, the female, the SLG (S-locus glycoprotein), the SRK (S-receptor kinase), the pollen, the column, the yeast, the Two-hybrid system, and the yeast. Protein kinase, pBTM116, SRK, kinase domain, pVP16, pBTM116, and so on. In addition, the secretory type of SLG is different from that of other parts of the body. The yeast (L40), the yeast (L40) and the yeast (L40) were cultured in the same way. The yeast (L40) and the yeast (L40) were isolated. There are many factors such as yeast interference, interaction, Leu/Trp/-His, His, AT, and so on. SLG9, yeast, yeast, yeast and yeast. On the one hand, SRK-kinase domain, yeast, yeast and yeast. SLG is responsible for monitoring the performance of the swimming pool and confirming the performance of the swimming machine. Because of the interaction between SLG and computer, there is a significant difference between the two. PBTM116-SLG, bait, pollen, interaction, exploration, purpose, cDNA, nuclear, nuclear and nuclear. The interaction in the column, the interaction in the pBTM116-SRK-KD, the interaction in the column, the interaction At present, we are in the process of exploring the interaction between cDNA and interaction. We are in the process of exploring the relationship between pVP16 and interaction.