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High-throughput centrifugation screening of mesenchymal stem cells

间充质干细胞的高通量离心筛选

基本信息

批准号：
22KJ2549
负责人：
大竹真央
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Tokyo Metropolitan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

間葉系幹細胞は、腫瘍化や拒絶反応のリスクが小さいことから、再生医療への応用が期待されている。一方、間葉系幹細胞は増殖培養においても一部細胞が骨芽細胞等へ分化してしまう。この分化偏向によって幹細胞性の低下や組織の骨化を引き起こす可能性がある。したがって、培養した幹細胞から未分化の間葉系幹細胞を選択的に分取する必要がある。しかし、従来の細胞分取技術は細胞表面に蛍光色素や磁気粒子を固定する必要があり、これらの修飾や除去工程での反応時間・反応試薬による細胞へのダメージが問題となる。そこで、私は細胞－接着基質との付着力をマーカーとした細胞分取技術の開発に取り組んでいる。本年度は、細胞接着力測定システムの構築及び、遠心力による細胞分取技術の原理実証について取り組んだ。細胞接着力測定システムの構築では、シングルボードコンピュータであるRaspberry Piやリチウムイオンバッテリーを搭載したコントローラユニットと加速度センサーやCMOSカメラ、顕微鏡対物レンズを搭載したセンサーユニットで構成される遠心観察装置を開発した。これを市販の卓上遠心機に取り付けることで、遠心中の細胞挙動をリアルタイムで観察することが可能となった。分取原理の実証では、正常細胞モデルとしてマウス由来線維芽細胞である3T3 Swiss albinoとがん細胞モデルとしてヒト肉腫由来細胞であるHT1080を使用し、ガラス基板表面との接着性を評価した。その結果、細胞非接着性タンパク質であるウシ血清アルブミンを事前にコーティングしたガラス基板において、3T3 Swiss albinoとHT1080の基板接着性に差が見られ、遠心分取技術の原理実証に成功した。来年度以降は、株化間葉系幹細胞を使用し、骨芽細胞への分化成熟度に応じた遠心分取の実証に取り組む。

Mesenchymal stem cells are expected to be used in regenerative medicine. One part of the stem cells from the mesenchymal stem cells were cultured and differentiated into bone bud cells. The differentiation bias of stem cells is low, and the ossification of tissues is possible. It is necessary to isolate and culture undifferentiated mesenchymal stem cells. In recent years, cell separation technology has been a problem in the field of cell surface modification, reaction time and reaction time. The development of cell-based separation technology This year, the construction of cell adhesion measurement system and the principle of cell separation technology were demonstrated. The construction of cell adhesion force measurement system is based on the development of a remote monitoring device equipped with a CMOS sensor and a micro mirror. This is the first time that a cell in a remote location has been detected. The principle of separation is demonstrated by the use of HT1080 in normal cells derived from linear cells and the evaluation of adhesion to substrate surfaces. As a result, the adhesion of the cell to the substrate was improved, and the principle of the remote separation technology was successfully demonstrated. In the coming year, we will focus on the use of differentiated mesenchymal stem cells and the practical evidence of remote harvesting of bone bud cells for their differentiation and maturity.