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画期的分子技術によるヘムの組織三次元イメージングとオミクス解析

使用创新分子技术进行三维血红素组织成像和组学分析

基本信息

批准号：
22KJ2578
负责人：
垣内亮
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Gifu Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

当該年度では、ヘムによって活性化され生体分子を修飾化するフェニレンジアミン-N-オキシド（PDANO）構造を開発した。また、PDANO構造に蛍光色素を導入したMtAANoxを合成し、機能を評価した。まず、モデルタンパク質（BSA）を用い、水溶液中での蛍光標識効率を評価した。水溶液中でMtAANoxをBSA存在下、へムと反応させ、蛍光ゲルイメージングを行った。その結果、BSA由来のバンドから蛍光シグナルが検出され、蛍光ラベル化が進行したことを確認した。次に、細胞内での蛍光標識効率を評価した。あらかじめ5-アミノレブリン酸（5-ALA）を投与してヘムの生合成を誘導した後に、MtAANoxを生細胞に添加し、未反応のプローブを洗浄後、蛍光イメージングを行った。その結果、ヘム生合成誘導群で強い蛍光シグナルが検出され、細胞内でも十分な蛍光標識効率を示した。以上の結果をうけて、組織イメージング実験へと適応した。ここでは、イメージングによってヘムを検出した例がない脳を標的臓器とし、組織イメージングを実施した。マウスに5-ALAを経口投与してヘムの生合成を誘導した後、MtAANoxを脳室内投与し、脳の凍結切片を作成してイメージングを行った。その結果、コントロール群と比べて、5-ALA投与群で強い蛍光が検出された。現在、MtAANoxが染色されている神経細胞について調査中ではあるが、脳内のヘムを検出することに世界で初めて成功した。以上の結果から、ヘムの生体内挙動解明のための有用な分析手法が不足している現状において、MtAANoxはヘムの生体内挙動・機能の解析に利用できる強力なツールとなることが期待できる。特に、MtAANoxはヘムの局所濃度に応じた蛍光標識が進行するため、脳などの生体組織でのヘムイメージングに適用でき、1細胞レベルでの遊離ヘム濃度分布の調査に活用することできる。

In the year of the year, in the year of the year, we are responsible for the activation of living molecules. In this year, we are responsible for the production of biological molecules. In this year, we are responsible for the activation of living molecules. In the current year, we are in the process of activating biological molecules. In the current year, we are responsible for the production of biological molecules. The production of light pigments by PDANO and UV light pigments are input into the synthesis of MtAANox compounds and the mechanical properties are tested. The rate of light labeling in aqueous solution is much higher than that of BSA. In the presence of "MtAANox" BSA in aqueous solution, the effect of light on the performance of the solution is discussed. The result of the test, the cause of the BSA, the light source, the output, the light, and the light. The rate of secondary and intracellular light labeling is different from that of other cells. This is the first time that 5-ALA has been added to the synthetic process, and that the MtAANox cell has been added. After the washing process, the light source has been added. The results show that the synthetic population is sensitive to light output, and the intracellular concentration is 10% sensitive to light labeling. As a result of the above results, the organization is responsible for the failure of the organization. Please tell me how to make sure that the device and the organization are responsible for the application. After the 5-ALA oral injection and the synthesis of the lead, the MtAANox was injected into the room, and the slices were made. The results of the test, the results of the comparison of the results, the results and the results. Now, the MtAANox staining system is in the middle of the world and the world is beginning to succeed. The results of the above results show that the useful methods of analysis in vivo are not enough to detect the symptoms of MtAANox in vivo, and the in vivo exercise machine can be used to analyze the use of strong force to monitor the performance of the machine. In particular, the MtAANox system is used to determine the accuracy of the information system, the health organization, the health system, the system, and the distribution of the system.