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ヒト胎生期神経幹細胞の特異性表出機構の解明とその応用によるマウス神経幹細胞ヒト化

阐明人胚胎神经干细胞特异性表达机制及其应用对小鼠神经干细胞的人源化

基本信息

批准号：
22KJ2469
负责人：
中川拓海
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ2469/
关键词：
大脳皮質発生神経幹細胞 CRISPR/Cas9 エピゲノム

项目摘要

CRISPR/Cas9 スクリーニングの次世代シーケンス（NGS）データを用いて、ノックアウト（KO）されることで神経幹細胞がニューロンに早期分化する遺伝子を探索した。続いて、解析の結果得られた遺伝子のうち、公共遺伝子発現データを元にして、胎生期神経幹細胞においてヒトでマウスより発現量の高い遺伝子に絞り込んだ。絞り込んだ候補遺伝子のうち、ヒト・マウス神経幹細胞間での発現量の差が有意であった数遺伝子の発現を、ヒトiPS細胞由来神経幹細胞（AF22）で減弱させ、AF22が早期に増殖を止めニューロンに分化するようになるのかをクローナル解析を行い検討した。その結果、遺伝子Xを標的とするshRNAを発現させたときに、著しいクローン数の減少が見られたため、以降の実験では遺伝子Xに焦点を当てることとした。続いて、遺伝子Xの発現をAF22で減弱後に分化誘導し、免疫染色を行ってニューロンへの分化能の評価を行った。結果、遺伝子Xの発現を減弱させたAF22は、コントロールよりもより多くのニューロンを産生していた。以上の結果から、遺伝子Xはヒト神経幹細胞が未分化性を維持し、長期間ニューロンを産生することができるという機能において重要な役割を担っていると考えられた。今後は、遺伝子Xがどのようにヒト神経幹細胞の長期間のニューロン産生を可能にしているのか、そのメカニズムを明らかにしていく。そのためにまず、遺伝子Xの発現を減弱させたAF22でRNA-seqを行い、発現が変動した遺伝子群を同定することにより、遺伝子Xがどのような遺伝子発現を制御しているのかを調べる予定である。また、胎生期マウス神経幹細胞において遺伝子Xを過剰発現することで、その増殖やニューロン産生期間の延長が観察されるかどうかも調べる予定である。

CRISPR/Cas9スクリーニングの Next Generation System (NGS) データをいて, ノックアウト ( KO) されることで神経Stem cells がニューロンにEarly differentiation する伝子をExploration した.続いて, the result of analysis is られた伝子のうち, the public legacy 伝子発 appear データを元にして, The stem cells of the embryonic stage are produced in the fetal period. The appearance of the candidate addendum 伝子のうち、ヒト・マウス神経stem cell The difference in quantity and the purpose of the difference in quantity and number of the remaining iPS cells are revealed. Stem cells (AF22) are not weakened, and AF22 is not allowed to proliferate in the early stages.ーロンにdifferentiationするようになるのかをクローナルANALYSISを行い検した. The results of その, the remaining 伝子の実験では缝子続いて, 缝子As a result, the コポ子The result of the above is that the undifferentiated nature of the remaining stem cells and the long-term maintenance of the stem cells are maintainedをGenerate することができるという Function においてimportant なservice cut を聣ていると考えられた. From now on, the long-term use of stem cellsにしているのか、そのメカニズムを明らかにしていく.そのためにまず、伝子Subgroup を同定することにより、缝子また、The fetal stage マウス神経stem cells において弝子The prolongation of the production period of the multiplication period is the extension of the growth period.