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ヌクレオソームコア粒子とMeCP2、SUV39H1三者複合体の構造解析

核小体核心颗粒、MeCP2和SUV39H1三元复合物的结构分析

基本信息

批准号：
22KJ2566
负责人：
牛島弘嗣
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

MeCP2とH3K27me3修飾ヌクレオソームのクライオ電子顕微鏡による単粒子解析を行った結果、MeCP2の密度マップが得られず、MeCP2のどの領域が結合に関与しているのかが分からなかった。そのため、クライオ電子顕微鏡以外の方法で結合領域を特定することを試みた。MeCP2とH3K27me3修飾ヌクレオソームの結合領域を明らかにするため、クロスリンク質量分析を行った。解析の結果、3箇所に架橋が検出された。そのうち、2箇所に関して、MeCP2の180番目のリジンがH2A、H2Bの距離的に離れた領域と架橋していることがわかった。このことから、MeCP2はフレキシブルにヌクレオソームと結合している可能性が示唆された。今後はより多くの架橋を検出するため、架橋条件やサンプル調製条件、測定条件などを検討していく。クライオ電子顕微鏡による観察の結果、MeCP2-H3K27me3修飾ヌクレオソームは特徴的な構造を取っていることが明らかになった。また、構造のバラエティも豊富であり、MeCP2の構造の柔軟性がこのことに影響を及ぼしている可能性が考えられる。この複合体構造が、溶液中でも形成されるのか、今後マスフォトメトリーなど別の手法を用いて証明する予定である。また、MeCP2のどの領域がこの複合体形成に重要であるかを調べるため、現在H3K27me3修飾ヌクレオソーム結合に重要だとわかっているMeCP2のC末端領域を５０アミノ酸残基ずつ欠損させた変異体を作製、調製した。この変異体MeCP2をH3K27me3修飾ヌクレオソームと混合し、クライオ電子顕微鏡で観察することで、MeCP2のどの領域が複合体形成に重要なのかを調べる予定である。

MeCP2 and H3K27 me3 modified microscopes were used to analyze individual particles. The density of MeCP2 was determined. The domain of MeCP2 was determined. There is no way to combine fields other than electron micromirrors. MeCP2 and H3K27 me3 modify the binding domain of the software to determine the quality of the software. The analysis results, three bridges were detected. The distance between H2A and H2B is 180 degrees. The distance between H2A and H2B is 180 degrees. This is the first time that MeCP2 has been able to combine all of its components. In the future, bridge conditions, modulation conditions and measurement conditions will be discussed. MeCP2-H3K27me3 modification of the structure of the electron microscope. The structural flexibility of MeCP2 and its influence on the structure and the possibility of its transformation are examined. The structure of the complex, the formation of the complex in solution, and the subsequent use of different methods to prove the predetermined MeCP2 domain is important for the formation of this complex. H3K27 me3 modification is important for the binding of MeCP2 C-terminal domain. 50 amino acid residues are not present in the complex. This heterogeneous MeCP2 H3K27 me3 modification is observed by electron microscopes, and the MeCP2 domain is important for complex formation.