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Elucidation of biological significance of GABA receptors in extrasynaptic

突触外 GABA 受体的生物学意义的阐明

基本信息

批准号：
22KJ2644
负责人：
貞光謙一郎
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Aoyama Gakuin University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ2644/
关键词：
GABA glycine GABA(A)受容体 glycine受容体抑制性シナプス伝達ゼブラフィッシュ

项目摘要

抑制性シナプスには、五量体型のGABA受容体(GABAR)とglycine受容体(GlyR)が存在し、抑制性神経伝達を担う。GABAR subunitとGlyR subunitから成るhybrid受容体が存在し、GABAとglycineそれぞれに応答するかを明らかにするために研究を進めた。先行研究を基に、GABAR subunitでは23種類のうち、GABARa1,GABARb3,GABAg2を、GlyR subunitでは7種類のうち、GlyRa1, GlyRbbのcRNA合成をそれぞれ単独に行った。cRNAはさまざまな組み合わせでXenopusの卵母細胞にinjectionすることで卵母細胞膜表面上に複数パターンのsubunitを発現させた。膜表面上に発現したsubunitは、二電極式ボルテージクランプ法による電流記録を行うことで、GABAやglycineへの開口特性を評価し、hybrid受容体を形成するか確認した。まずは、GABARb3とGABARg２とGlyRa1を共発現させると、それぞれGABAとglycine両方の暴露により開口が見られた。しかし、GABARb3とGABARg2から構成される受容体はGABA暴露で、GlyRa1のみから構成される受容体はglycine暴露で開口することから、それぞれGABAとglycine両方の暴露に応答するhybrid受容体を評価できたと断言できない。この問題点を解決するために今後は、GABARb3とGABARg2のhetero五量体発現抑止及びGlyRa1のhomo五量体発現抑止のために、GABARb3とGlyRa1のsubunitを連結させたconcatemerをクローニングする。合成したconcatemerはGABARg2と共発現させ、GABAとglycine両方に対して応答するかを検証する。

GABAR and GlyR exist in the five quantities of inhibitory neurotransmitter, and inhibitory neurotransmitter is a concern. GABAR subunit and GlyR subunit are both present and unknown. The first research base, GABAR subunit, GABARa1,GABARb3,GABAg2, GlyR subunit, GlyRa1, GlyRbb and cRNA synthesis are all independent. cRNA is incorporated into Xenopus oocytes, and multiple subunits are produced on the surface of the oocyte membrane. The formation of a subunit on the surface of the film, a two-electrode, a current recording method, an evaluation of the opening characteristics of GABA and glycine, and a hybrid receptor were confirmed. GABARb 3, GABARg2 and GlyRa1 are found together. GABARb3 and GABARg2 are the components of a hybrid receptor with GABA exposure, GlyRa1 is the component of a hybrid receptor with GABA glycine exposure, and GABARb 3 is the component of a hybrid receptor with GABA glycine exposure. This problem is solved by linking GABARb3 and GlyRa 1 subunits to each other. Synthesis of GABARg2 and GABA and glycine