アルツハイマー病のアポリポプロテインE機能を解析する新規ミクログリアモデルの作出

创建新的小胶质细胞模型来分析载脂蛋白 E 在阿尔茨海默病中的功能

• 批准号: 22KJ2686
• 负责人: 村上 玲
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2023
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2023-03-08 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ2686/
• 关键词: ミクログリア; APOE遺伝子; iPS細胞; 認知症; アルツハイマー病; ゲノム編集

本研究は医療費介護費により医療財政を圧迫する認知症の患者数を減らすために、認知症の最大の原因疾患であるアルツハイマー病の発祥機序を解明することを目指している。近年ではアルツハイマー病の最大のリスク因子であるAPOE遺伝子e4アリルを持つミクログリアが病態形成に影響することが明らかになりつつあるが、ミクログリアはin vitroとin vivoで遺伝子発現が異なるなどin vivoでのヒトミクログリア研究は未だ途上である。そのため、本研究ではアルツハイマー病病態におけるAPOE4/4ヒトミクログリア機能をin vivoレベルで解析するモデルを作出すること目的としている。本研究ではこれまでに健常人由来のparental APOE3/3 iPS細胞からCRISPR/Cas9システムを用いたゲノム編集に技術により、isogenic APOE4/4 iPS細胞の作製に成功している。さらにミクログリア発生に重要な転写因子であるPU.1をTet onシステムで発現するAPOE3/3 iPS細胞およびAPOE4/4 iPS細胞の作出にも成功している。当研究室で開発した誘導法によってiPS細胞からミクログリアを誘導した。誘導した細胞はミクログリアマーカーのIBA1やTREM2陽性であり、蛍光ビーズを用いた貪食機能アッセイにより貪食機能を持つことが明らかになった。これらの結果から、誘導した細胞は機能的なミクログリアであると判断した。本研究ではこれまでにAPOE3/3型ミクログリアに対して、アルツハイマー病の病態タンパク質であるアミロイドβ処理またはリポポリサッカライドとインターフェロンガンマ処理を行うことで未処理群と比較してミクログリアからのapoEタンパク質の分泌が亢進することを明らかにした。

This study aims to clarify the mechanisms underlying the decline in the number of patients with cognitive disorders due to health care costs and financial constraints, and to identify the greatest causes of cognitive disorders. In recent years, APOE gene e4 is the largest factor affecting the development of disease, and research on APOE gene in vitro and in vivo has not yet been carried out. The purpose of this study is to analyze the disease pathologies of APOE4/4 and to make the disease pathologies of APOE4/4. In this study, we successfully constructed parental APOE3/3 iPS cells from healthy individuals using CRISPR/Cas9 gene encoding techniques. APOE3/3 iPS cells and APOE4/4 iPS cells were successfully produced by the PU.1-Tet on cell system, which is an important factor in the development of cell culture. When the laboratory developed the induction method, iPS cells were induced to grow. Inducing the cells to be gluttonous, the cells to be gluttonous. The result of this is that the cells are induced to function. In this study, we compared APOE3/3 with APOE3/3 and found that APOE 3/3 had a higher secretion of apoE than APOE 3/3.