反応場の情報を統合した植物RISC形成機構の解明

整合反应场信息阐明植物RISC形成机制

• 批准号: 22KJ2862
• 负责人: 藤本 祐司
• 金额: $ 3.33万
• 依托单位: Rikkyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2023
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2023-03-08 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ2862/
• 关键词: processing body; RNAサイレンシング

2022年度開設の研究室のため、セットアップの作業を行なった。植物の生育、培養細胞の維持管理に問題がないことを確認した。また、シロイヌナズナのDCP1、SGS3のクローニングを行い、アグロインフィルトレーション法による一過的発現によりNicotiana benthamianaの葉において、GFPやmcherryなどの蛍光タンパク質を付加したこれらのタンパク質の局在が、先行研究や前所属における結果と変わりなく観察できることを確認した。SGS3については、N末端側に存在するプリオン様ドメインが局在に影響することが報告されているが、この局在変化についても同様に再現できることを合わせて確認した。SGS3については、全長タンパク質と共に、これらの変異体についてもFAPS法による解析に供試したいと考えている。split TurboID法に用いるTurboIDおよびその分割変異体についても作成を進めており、今後これらのN. benthamiana葉内における活性を確認する予定である。SGS3に加えて、二次的siRNA生成に必要な因子であるAGO7、miR390、TAS3、SDE5、RDR6についてもN. benthamianaにおいて一過的に発現が可能であることを確認し、これらの因子の共発現によりtasiRNAがノーザンブロットで検出できる程度に蓄積することを確認した。今後はこれらの因子を共発現させた場合の局在の変化なども合わせて解析していく予定である。

在2022年开业的实验室进行了设置工作。证实植物生长和培养细胞的维持没有问题。此外，克隆了拟南芥中的DCP1和SGS3，并证实，由于可以观察到由于Agroinfiltration方法通过AgroInfiltration通过瞬时表达而导致的烟草蛋白质（例如GFP和MCHERRY）的这些蛋白质，例如GFP和MCHERRY，因此可以观察到以前的研究和先前的隶属关系的结果。据报道，N末端存在的类似prion的领域会影响定位，但我们确认这种定位变化也可以以相同的方式复制。关于SGS3，我们想测试这些突变体以及全长蛋白，以通过FAPS方法进行分析。我们还开发了用于分裂涡轮的方法中的涡轮增压物及其分裂突变体，我们计划确认它们在这些本田乳杆菌叶片中的活性。除SGS3外，我们还可以证实，在本泰米亚氏乳杆菌中产生次级siRNA所必需的因子的瞬时表达也可以得到证实，并且tasirna积累了以下程度，可以通过共同表达这些因素来检测到北面印迹。将来，我们计划分析这些因素共表达时的本地化变化。