反応場の情報を統合した植物RISC形成機構の解明

2022年度開設の研究室のため、セットアップの作業を行なった。植物の生育、培養細胞の維持管理に問題がないことを確認した。また、シロイヌナズナのDCP1、SGS3のクローニングを行い、アグロインフィルトレーション法による一過的発現によりNicotiana benthamianaの葉において、GFPやmcherryなどの蛍光タンパク質を付加したこれらのタンパク質の局在が、先行研究や前所属における結果と変わりなく観察できることを確認した。SGS3については、N末端側に存在するプリオン様ドメインが局在に影響することが報告されているが、この局在変化についても同様に再現できることを合わせて確認した。SGS3については、全長タンパク質と共に、これらの変異体についてもFAPS法による解析に供試したいと考えている。split TurboID法に用いるTurboIDおよびその分割変異体についても作成を進めており、今後これらのN. benthamiana葉内における活性を確認する予定である。SGS3に加えて、二次的siRNA生成に必要な因子であるAGO7、miR390、TAS3、SDE5、RDR6についてもN. benthamianaにおいて一過的に発現が可能であることを確認し、これらの因子の共発現によりtasiRNAがノーザンブロットで検出できる程度に蓄積することを確認した。今後はこれらの因子を共発現させた場合の局在の変化なども合わせて解析していく予定である。

2022年度開設の研究室のため、セットアップの作業を行なった。植物の生育、培養細胞の維持管理に問題がないことを確認した。また、シロイヌナズナのDCP1、SGS3のクローニングを行い、アグロインフィルトレーション法による一過的発現によりNicotiana benthamianaの葉において、GFPやmcherryなどの蛍光タンパク質を付加したこれらのタンパク質の局在が、先行研究や前所属における結果と変わりなく観察できることを確認した。SGS3については、N末端側に存在するプリオン様ドメインが局在に影響することが報告されているが、この局在変化についても同様に再現できることを合わせて確認した。SGS3については、全長タンパク質と共に、これらの変異体についてもFAPS法による解析に供試したいと考えている。split TurboID法に用いるTurboIDおよびその分割変異体についても作成を進めており、今後これらのN. benthamiana葉内における活性を確認する予定である。SGS3に加えて、二次的siRNA生成に必要な因子であるAGO7、miR390、TAS3、SDE5、RDR6についてもN. benthamianaにおいて一過的に発現が可能であることを確認し、これらの因子の共発現によりtasiRNAがノーザンブロットで検出できる程度に蓄積することを確認した。今後はこれらの因子を共発現させた場合の局在の変化なども合わせて解析していく予定である。