B型肝炎ウイルス侵入過程における受容体共役因子の役割と制御機構に関する研究

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B型肝炎ウイルス（HBV）は肝細胞表面上のナトリウム-タウロコール酸共輸送体に吸着後、受容体チロシンキナーゼ（RTK）ファミリーの上皮成長因子受容体（EGFR）のエンドソーム輸送を介して内在化し、エンドソームへと輸送される。本研究は、HBV輸送に必要な因子や受容体共役因子としての機能を有するRTKを同定し、それら因子のHBV侵入における役割を解析することでHBV感染成立の分子機構の解明を目指す。AlphaScreen法でEGFR結合親和性が高かったEGFRユビキチン化酵素（E3リガーゼ）を取得し、これらE３リガーゼをノックダウンしたHBV感染許容細胞でHBV感染を低下させたE3リガーゼを5候補にまで絞った(申請時点)。本年度は、細胞内侵入後のHBVエンドソーム輸送および感染機構の解析を行った。申請時点で得られていた５つの候補E3リガーゼに対して、細胞内でのEGFR結合能を免疫沈降法で、また、EGFRユビキチン化能を免疫ブロッティングで評価し、一部の候補E3リガーゼがEGFRに結合し、EGFRをユビキチン化することが示された。HBVエンベロープタンパク質の一部を模倣したペプチドプローブとHBV感染許容細胞株を用いた共焦点顕微鏡解析により、現時点でEGFR結合能およびEGFRユビキチン化能が確認できている候補E3リガーゼのHBVエンドソーム輸送の制御段階を評価した。以上の解析結果から、EGFRユビキチン化E3リガーゼのHBV感染制御への寄与が示唆された。本年度の研究成果は国内学会および国際学会で発表した。