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B型肝炎ウイルス侵入過程における受容体共役因子の役割と制御機構に関する研究

受体偶联因子在乙型肝炎病毒侵袭过程中的作用及调控机制研究

基本信息

批准号：
22KJ2816
负责人：
塩野谷果歩
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Tokyo University of Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ2816/
关键词：
B型肝炎ウイルス HBV 侵入ウイルス EGFR ユビキチン化

项目摘要

B型肝炎ウイルス（HBV）は肝細胞表面上のナトリウム-タウロコール酸共輸送体に吸着後、受容体チロシンキナーゼ（RTK）ファミリーの上皮成長因子受容体（EGFR）のエンドソーム輸送を介して内在化し、エンドソームへと輸送される。本研究は、HBV輸送に必要な因子や受容体共役因子としての機能を有するRTKを同定し、それら因子のHBV侵入における役割を解析することでHBV感染成立の分子機構の解明を目指す。AlphaScreen法でEGFR結合親和性が高かったEGFRユビキチン化酵素（E3リガーゼ）を取得し、これらE３リガーゼをノックダウンしたHBV感染許容細胞でHBV感染を低下させたE3リガーゼを5候補にまで絞った(申請時点)。本年度は、細胞内侵入後のHBVエンドソーム輸送および感染機構の解析を行った。申請時点で得られていた５つの候補E3リガーゼに対して、細胞内でのEGFR結合能を免疫沈降法で、また、EGFRユビキチン化能を免疫ブロッティングで評価し、一部の候補E3リガーゼがEGFRに結合し、EGFRをユビキチン化することが示された。HBVエンベロープタンパク質の一部を模倣したペプチドプローブとHBV感染許容細胞株を用いた共焦点顕微鏡解析により、現時点でEGFR結合能およびEGFRユビキチン化能が確認できている候補E3リガーゼのHBVエンドソーム輸送の制御段階を評価した。以上の解析結果から、EGFRユビキチン化E3リガーゼのHBV感染制御への寄与が示唆された。本年度の研究成果は国内学会および国際学会で発表した。

Hepatitis B virus (HBV) is a receptor for epidermal growth factor receptor (EGFR) that mediates the internalization and transport of EGFR after adsorption of the receptor on the surface of hepatocytes. This study aims to elucidate the molecular mechanisms underlying HBV infection by identifying RTK genes and analyzing the mechanisms underlying HBV invasion and infection. AlphaScreen method: EGFR binding affinity is high, EGFR binding affinity is low, EGFR binding affinity is high, EGFR binding affinity is high, EGFR binding affinity is high This year, the analysis of HBV transmission and infection mechanism after intracellular invasion was carried out. 5 candidates for EGFR binding activity in cells are evaluated by immunoprecipitation, EGFR binding activity in cells are evaluated by immunoprecipitation, and some candidates for EGFR binding activity are evaluated by immunoprecipitation. Part of the HBV genome was analyzed by confocal microscopy, and the EGFR binding energy and EGFR transcription energy were confirmed at the current point. The candidate E3 was evaluated for the control stage of HBV genome transmission. The above analysis results show that EGFR has been successfully used to control HBV infection. This year's research results are presented to both domestic and international societies.