PCR遺伝子増幅法による浄化槽でのウイルス動態測定

PCR基因扩增法测定化粪池病毒动态

• 批准号: 08750671
• 负责人: 上床 和弘
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08750671/
• 关键词: PCR; ウイルス; 浄化槽

糞便中に排泄されるウイルスは人への二次感染源となることから、浄化槽を初めとして環境中での動態を把握することは公衆衛生上重要である。しかし、そのようなウイルス、特に環境中に低濃度で存在するウイルスの検出はこれまで実験的に困難であり、腸内細菌群のバクテリオファージの動態研究等で代用されることが多かった。そこで我々は、糞便中に排泄される環境抵抗性ウイルスを実験に用いて、その浄化槽における動態の知見を得ることを目的とした。環境抵抗性ウイルスのモデルとしてパルボウイルスを用いその浄化槽に於ける動態をPCR遺伝子増幅法で測定した。精製したパルボウイルスを用いて三種類の検出系に関して検討を加えた。細胞培養を用いた検出系では、感染性を持つウイルスだけを検出できるが、通常検出までに十数日間を要し、感度は中程度であり、時間、経費の面で問題があった。またパルボウイルスだけでなく他のウイルスが共存している場合には、さらにウイルス同定が必要であった。ELISAは、パルボウイルスだけを特異的に約30分で検出できたが、感度が低く、細胞培養法の約一万分の一でしかなかった。これに対して、PCRでは他の二法よりも感度は高く、細胞培養法の四十倍以上で、パルボウイルスだけを二時間以内に検出することが出来た。以上の結果より環境抵抗性のウイルス検出にはPCR遺伝子増幅法が適していると考えられ、パルボウイルスを添加した浄化槽でのウイルス動態を測定した。しかし浄化槽内にはPCRの阻害物質が存在し定量的な成績を得ることができなかった。そこでこの阻害物質除去法を検討し、陽イオン界面活性剤が阻害物質除去に効果的であることを見出し、再度測定したところウイルス粒子が汚泥に吸着され濃縮されている現象が観察された。

に in feces excretion さ れ る ウ イ ル ス は people へ の secondary infection sources と な る こ と か ら, incorporated slot early を め と し て environment で の dynamic を grasp す る こ と は public health on important で あ る. し か し, そ の よ う な ウ イ ル ス, に に low concentration in the environment exist で す る ウ イ ル ス の 検 out は こ れ ま で be 験 に difficult で あ り, intestinal bacteria group of の バ ク テ リ オ フ ァ ー ジ の dynamic research で substitute さ れ る こ と が more か っ た. そ こ で I 々 は, に in feces excretion さ れ る environment resistance ウ イ ル ス を be 験 に with い て, そ の incorporated the slot に お け る dynamic の knowledge を have る こ と を purpose と し た. Environment resistance ウ イ ル ス の モ デ ル と し て パ ル ボ ウ イ ル ス を with い そ の incorporated slot に in け る dynamic を PCR heritage 伝 child rights で method to determine the picture し た. Refined し た パ ル ボ ウ イ ル ス を with い て three kinds の 検 out department に masato し て を 検 please add え た. Cell culture を with い た 検 out department で は, infectious を つ ウ イ ル ス だ け を 検 out で き る が, usually 検 ま で に dozen daytime を し, sensitivity degree in は で あ り, time, 経 の で problem が あ っ た. ま た パ ル ボ ウ イ ル ス だ け で な く he の ウ イ ル ス が coexistence し て い る occasions に は, さ ら に ウ イ ル ス with が necessary で あ っ た. ELISA は, パ ル ボ ウ イ ル ス だ け を specific に about 30 points で 検 out で き た が low く が, sensitivity and cell culture method about one very の で の し か な か っ た. こ れ に し seaborne て, PCR で は he よ の two method り も sensitivity high は く, cell culture method over 40 times の で, パ ル ボ ウ イ ル ス だ け を within two time に 検 out す る こ と が た. の above results よ り environment resistance の ウ イ ル ス 検 out に は PCR heritage 伝 child rights amplitude method が optimum し て い る と exam え ら れ, パ ル ボ ウ イ ル ス を add し た incorporated the slot で の ウ イ ル ス determination of dynamic を し た. し か し incorporated the groove に は PCR の resistance against the が matter し quantitative な result を must る こ と が で き な か っ た. そ こ で こ の resistance against material removal method を beg し 検, Yang イ オ ン interface active tonic が resistance against material remove に unseen fruit で あ る こ と を again see し, determination of し た と こ ろ ウ イ ル に が ス particle sludge sorption さ れ enrichment さ れ て い る phenomenon が 観 examine さ れ た.

项目成果

K.Uwatoko,他4名: "Canine parvovirus bind to multiple cellular membrane proteins from both permissive and nonpermissive cell lines." Veterinary Microbiology. 51. 267-273 (1996)

K. Uwatoko 和其他 4 人：“犬细小病毒与允许和非允许细胞系的多种细胞膜蛋白结合。”兽医微生物学 51. 267-273 (1996)

K.Uwatoko,他4名: "Rapid and efficient method to eliminate substances in hibitory to the polymerase chain reaction from animal fecal samples." Veterinary Microbiology. 52. 73-79 (1996)

K. Uwatoko 和其他 4 人：“从动物粪便样品中消除抑制聚合酶链反应的物质的快速有效方法。” 52. 73-79 (1996)。

上床和弘,他3名: "PCRによるパルボウイルスの検出" 浄化槽研究. 8・No.2. 35-40 (1996)

Kazuhiro Uetoko 等 3 人：“通过 PCR 检测细小病毒”《化粪池研究》8·No.2（1996）。