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立体的ヒストンコードによる新たな遺伝子発現制御

通过空间组蛋白密码控制新的基因表达

基本信息

批准号：
22KJ2348
负责人：
花木駿介
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ2348/
关键词：
プロリン異性化ヒストン

项目摘要

本年度はプロリン異性化酵素FKBP52(FK506 Binding Protein 52)がヒストンH3のプロリン残基を異性化するか検証した。プロリンの異性化を検出する方法として、キモトリプシン法の構築を行なった。最初にキモトリプシン法に用いるヒストンペプチドの合成を行った。FKBP52が異性化すると推測されるプロリン残基までは通常のペプチド配列を合成し、直後にフェニルアラニンとペプチジル-パラニトロアニリンを融合させた。合成ペプチドはプロリン残基が異性化されることによりキモトリプシンによりペプチジル-パラニトロアニリンが遊離し吸光度が上昇する。FKBP52を添加することで、吸光度が増加したことから、FKBP52はヒストンペプチドを異性化することが分かった。FKBP52の酵素活性を欠損させた変異体では吸光度は変化しなかったことから、FKBP52の酵素活性依存的にヒストンペプチドを異性化していることが明らかになった。加えて、FKBP52の異性化が基質のリン酸化状態に依存しているか探索するために、リン酸化・非リン酸化ペプチドを合成した。プロリン異性化酵素が活性を発揮するためには、特定の条件が必要となることが多い。代表的なプロリン異性化酵素であるPin1は、標的となるプロリンの直前に位置するセリン、スレオニンのリン酸化が異性化を惹起するための前提条件となっている。FKBP52によるプロリンの異性化に対しても近傍のリン酸化が目印となって作用する可能性を検証するために、リン酸化・非リン酸化ペプチドを合成し、アッセイ系を構築した。

This year's heterosexual enzyme FKBP52 (FK506 Binding Protein 52) is a heterosexual enzyme of H3 hydrophilic enzyme.プロリンの heterosexualization を検出する法として, キモトリプシン法のconstruct を行なった. Initially, にキモトリプシン法に was synthesized from いるヒストンペプチドのを行った. FKBP52's heterosexuality is presumed to be the same as that of the normal residues of FKBP52. Synthetic し, straight back にフェニルアラニンとペプチジル-パラニトロアニリンをfusion させた. Synthetic ペプチドはプロリン residue がisolated されることによりキモトリプシンによりペプチジル-パラニトロアニリンがFree しAbsorbance がRISE る. FKBP52することで、Absorbance increaseしたことから、FKBP52はヒストンペプチドをHeterosexualizationすることが分かった. The enzyme activity of FKBP52 has been reduced, the absorbance has been changed, and the absorbance has been changed. FK The enzyme activity of BP52 depends on the heterosexualization of the enzyme. Add えて, FKBP52's anisotropy matrix のリン acidification state dependence しているか explore するために, リン acidification and non-リン acidification ペプチドを synthesis した. The activity of プロリリンenzyme is high, and the specific conditions are necessary. The representative Nana heterozyme is Pin1, and the target Nana is directly in front of the position.るセリン, スレオニンのリン acidification が heterosexualization を caused するためのpremises となっている. FKBP52 is a heterosexualized に対しても near the のリン acidified が目print となってeffect するFunctional test certificate, リン acidified and non-リン acidified ペプチドをsynthetic system, アッセイ system を constructed system.