ヒトiPS細胞を用いた肺ヒト化マウスの確立と創薬・再生医療への応用

利用人iPS细胞建立肺人源化小鼠及其在药物发现和再生医学中的应用

• 批准号: 22KJ1830
• 负责人: 山形 昂
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2023
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2023-03-08 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ1830/
• 关键词: iPS細胞; 肺ヒト化マウス; 肺原芽細胞; 細胞移植

random integrationにより樹立していたレポーターiPS細胞では、silencingにより徐々に蛍光タンパク質の発現量が低下することが判明した。そのためvectorを再設計し、safe harborであるAAVS1 locusへとCRISPR knock inを行なった改良型のレポーターiPS細胞を樹立した。この細胞は正常核型を有し、蛍光タンパク質の発現量低下が起こらないことを確認できた。このiPS細胞から肺原芽細胞まで分化誘導した後にナフタレン障害マウスの左肺へと経気管的に細胞移植を行なったところ、移植14日目までその生着を確認することができた。一方で日数経過とともに生着が低下し、代わりに肝臓への生着が見られることが判明した。マウス肝臓を採取して免疫組織染色を実施したところ、SFTPC-GFP陽性細胞も認められ、マウス肝臓に定着した肺原芽細胞がⅡ型肺胞上皮細胞にまで分化していることが示唆された。またさらなる細胞置換率の向上を目指し、マウス肺のⅡ型肺胞上皮細胞を抗体を用いて特異的に障害するための条件検討を行った。移植時に細胞を包埋する基質についても検討を進めた。呼吸器疾患特異的iPS細胞についても肺移植を実施するため、肺胞微石症患者由来iPS細胞と、その原因遺伝子であるSLC34A2をノックアウトした健常者由来iPS細胞を樹立した。さらにこれらのiPS細胞についても発光・蛍光共レポーター細胞を樹立し、正常核型を有し、蛍光タンパク質の発現量低下が起こらないことを確認できた。Ⅱ型肺胞上皮はサーファクタント産生や肺胞腔のリン恒常性維持などの機能を有することが知られており、移植した疾患特異的細胞においてもこれらの機能を生化学的・形態学的に評価する予定である。

random integrationによりEstablishment of iPS cellsでは、sil encingにより雪々に蛍光タンパクqualityの発existingquantityがlowすることがdeterminationした.そのためvectorをredesignし、safe harborであるAAVS1 locusへとCRISPR knock inを行なったimproved のレポーターiPS cells をestablishment した. The cells have a normal karyotype and the quality of the cells is low, and the quality is low and the cells have been confirmed.このiPS cells から lung protoblasts まで differentiation induction した にナフタレン barrier マウスのleft lung へと経The cell transplantation of the tube is carried out and the transplantation is confirmed on the 14th day of the year. One party's number of days has passed, and it has become low, and it has become clear. The immunohistological staining of the liver tissue of the maize liver was performed, and the SFTPC-GFP positive cells were identified. , The liver cells are fixed in the lungs and the type II pneumocyte epithelial cells are differentiated. The cell replacement rate of the またさらなを eye refers to the し, and the マウス lung type Ⅱ pneumocyte epithelial cell を antibody を uses the いて specific に barrier するための condition を行った. During transplantation, the cells are embedded in the matrix and the cells are embedded in the matrix. iPS cells specific for respiratory diseases, lung transplantation, iPS cells derived from patients with pneumonic microlithiasisと, その Cause of death 伝子であるSLC34A2をノックアウトしたHealthy person origin iPS cells をEstablishment of した. iPS cells are established in There is no normal karyotype, and the quality of the karyotype is low, and the amount is low and the karyotype is confirmed. Type Ⅱ pneumocyte epithelial epithelium produces pneumocyte cavity and maintains the function of the pneumocytes.おり、Transplantation したDisease-specific cells においてもこれらのfunctional をbiochemical and morphological evaluation に価するpredetermined である.