超長波長光で活性化されるヘテロマー型ロドプシンNeoRの構造機能解析とその応用

超长波长光激活异聚视紫红质NeoR的结构和功能分析及其应用

• 批准号: 22KJ0723
• 负责人: 金 穂香
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2023
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2023-03-08 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ0723/
• 关键词: ロドプシン; NeoR; クライオ電子顕微鏡

NeoRが持つ、他の微生物型ロドプシンと一線を画したユニークな特徴の一つは、NeoRが別の酵素型ロドプシン（RGC）と融合し、ヘテロ多量体を形成することである。１年目はまず、このヘテロ多量体の単離および構造解析を試みた。NeoRおよびRGCをそれぞれ発現、精製し、プルダウン実験によるヘテロ多量体の再構成を試みたが、安定なヘテロ多量体を得ることができなかった。そこで、プルダウンに用いるアフィニティタグの検討と並行して、クライオ電子顕微鏡を用いたNeoR単独の立体構造解析を試みた。二次元平均画像から、NeoRが単量体として存在することは確認できたが、鮮明な二次構造は観測できず、三次元再構成には至らなかった。この原因として、NeoRの酵素ドメインの運動性の高さが挙げられるため、今後はこれを軽減するための検討が必要であると考えられる。また、当初の目的であった安定なヘテロ多量体を単離するための検討として、他の生物種由来のNeoRにも焦点を当てて研究を進める必要がある。

NeoR is a unique enzyme type protein (RGC), which is a fusion protein and forms a multi-quantity of NeoR. 1 year ago, we tried our best to analyze the structure of the multi-volume system. NeoR and RGC are developed, refined, and reorganized into multiple components. The three dimensional structure analysis of the electron microscope was carried out by using the electron microscope. Two-dimensional average image, NeoR, single volume, existence, confirmation, distinct secondary structure, three-dimensional reconstruction, The reason for this is that NeoR enzyme activity is high, and it is necessary to discuss it in the future. For this reason, it is necessary to study the origin of NeoR in order to stabilize and isolate the organism.