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蚊特異的フラビウイルスを利用した病原性フラビウイルスにおける宿主特異性機構の解明

利用蚊子特异性黄病毒阐明致病性黄病毒的宿主特异性机制

基本信息

批准号：
22KJ0133
负责人：
小林広子
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

蚊媒介性フラビウイルスは、日本脳炎ウイルス（JEV）やデングウイルス（DENV）等の脊椎動物にも感染性を有する病原性フラビウイルスと、蚊のみで感染が成立するとされている蚊特異的フラビウイルスに分類される。蚊特異的フラビウイルスと病原性フラビウイルスは遺伝的には近縁であるが、宿主特異性の違いに関わる機構は、ほとんど明らかとなっていない。本研究課題「蚊特異的フラビウイルスを利用した病原性フラビウイルスにおける宿主特異性機構の解明」では、脊椎動物に感染が成立する日本脳炎ウイルス（JEV）と、蚊特異的フラビウイルスであるバルケジライクウイルス（BJLV）の相同領域組換えウイルスを作出し、その性状を野生型ウイルスと比較解析することで、フラビウイルスの宿主特異性に寄与するウイルス因子を探索する。2022年度は、構造タンパク質prM、およびEの相同領域を置換したキメラウイルスの作成に成功し、キメラウイルスの宿主特異性を評価した。その結果、BJLVの構造タンパク質prMEは、哺乳類細胞において、蚊由来培養細胞と同様に培養温度依存的に侵入過程において機能することが明らかになった。細胞培養温度がウイルスの動態に影響することが判明した為、複数の蚊特異的フラビウイルスを対象に、蚊由来培養細胞を用いて、哺乳類動物細胞の培養温度条件で増殖できる温度順化ウイルス株の取得を開始した。また、BJLVの非構造タンパク質や非翻訳領域に関して、哺乳類細胞における複製への影響を調べるために、それらの領域の組換えウイルスの作出を試みたが、CPER法でのキメラウイルスの作成は困難であった。そこで、JEVとBJLVに関して、構造タンパク質領域をルシフェラーゼ遺伝子に置換したレプリコンアッセイの構築を開始し、構造タンパク質以外の領域に関して宿主特異性を検証する。

The infection of vertebrates such as mosquito vector virus, Japanese virus virus (JEV), mosquito virus (DENV), etc. is classified as pathogenic virus and mosquito virus. Mosquito specific pathogens, host specific pathogens, host specific pathogens, host This research topic is "Understanding host-specific mechanisms for the use of mosquito-specific pathogens" and "comparative analysis of wild-type pathogens" in vertebrate infection with Japanese encephalitis virus (JEV) and mosquito-specific pathogens (BJLV) in the same domain. The host-specific characteristics of the virus are explored. In 2022, the host specificity of the structure was evaluated by replacing the same domain with the same domain. As a result, the structure of BJLV is characterized by its ability to function in mammalian cells, in cultured cells, and in temperature-dependent invasive processes. The effect of cell culture temperature on cell dynamics was identified, a number of mosquito-specific cell dynamics were identified, the use of mosquito-derived cell cultures, and the initiation of mammalian cell culture temperature conditions. BJLV is a non-structural, non-translational domain, and mammalian cell replication. It is difficult to make CPER methods. JEV and BJLV are related to the structure of the host and the quality of the host, and the structure of the host and the quality of the host are related to the structure of the host.