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新たな選択的細胞標識ツールの構築と神経回路・活動の細胞種間ネットワーク解析

构建新的选择性细胞标记工具以及神经回路和活动的细胞间网络分析

基本信息

批准号：
22K19481
负责人：
勢力薫
金额：
$ 4.16万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-06-30 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K19481/
关键词：
アデノ随伴ウイルスベクター神経科学

项目摘要

本研究では、神経科学研究においてin vivo遺伝子導入に利用されるアデノ随伴ウイルスベクターを用いて、神経細胞の細胞種選択的に遺伝子を発現させる新たな細胞標識AAVツールの構築を目指している。独自に最適化した組み換えAAV内の調節性配列の配置を利用して、当該年度は主にドーパミン神経や、オキシトシン、バソプレシン神経に選択的な遺伝子発現を可能にするAAVの構築を行なった。その結果、オキシトシン神経については、視床下部室傍核において、９０％以上の細胞種選択性で、オキシトシン産生細胞の８０%以上を標識可能なAAVの構築に成功した。加えて、構築したAAVシステムを用いて、野生型マウスにおける視床下部室傍核のオキシトシン神経の軸索線維を蛍光タンパク質で標識し、顕微鏡全脳イメージング技術FASTを用いて撮像することにより、その軸索投射パターンを全脳レベルで解析することが可能になった。また、高発現量の蛍光タンパク質を要すると考えられる軸索投射の全脳イメージングにおいても、蛍光タンパク質発現細胞の９０％以上がオキシトシン神経に限られていたことから、細胞種選択性に加えて導入遺伝子の発現効率も十分であると考えられる。他の細胞種については、現時点では90%以上の細胞種選択性に至らないものの、組み換えAAVに搭載する配列をさらに調整することで改善できる可能性を見出している。

本研究主要是探讨，神绍科学研究的重组人胚在体内的利用重组人胚的复制，伴随重组人胚的复制而使用重组人胚，神绍细胞诱导的重组人胚的新的重组人胚细胞的AAV重组人胚的复制。单独使用最大化的重组腺病毒AAV内同源性配列配置利用同源性，当每年宿主细胞增殖时，宿主细胞增殖抑制剂、宿主细胞增殖抑制剂、宿主细胞增殖抑制剂和宿主细胞增殖抑制剂的诱导子都有可能抑制AAV的增殖。哺乳动物，看护人的哺乳动物神绍绍氏疟原虫，床下部室浴核病毒，90%以上的腺细胞增殖性坏死，看护人的哺乳动物生腺细胞增殖性坏死80%以上都有可能使AAV病毒复制成功。加护规范、免疫缺陷AAV病毒检测使用规范、新生儿型骨髓瘤病毒感染床下部分室浴核内淋巴瘤患者的神绍绍明搜寻、微血管全切除光镜检查技术、FAST介入使用规范影像诊断和治疗申请、免疫缺陷搜寻放射性全切除肿瘤解除分析等可能出现的并发症。高剂量阿霉素，高剂量他将细胞增殖转化为正常细胞，增殖点超过90%以上的细胞增殖性增殖至正常细胞，然后将AAV重组腺相关病毒配列成一个完整的基因组，改善细胞增殖的可能性。