Understanding of initiation signals of intercellular mitochondria transfer

本研究の目的は、ミトコンドリアの細胞間水平移動のメカニズムについて、特にミトコンドリアの移動がどのように開始されるのかについて解明し、細胞間コミュニケーションを制御するための知見を得ることである。これにより、がん細胞の耐性獲得の阻止や酸化ダメージを受けた組織の修復を目的とする新しい治療方法の開発が期待される。本研究では、レンチウイルスベクターを用いて遺伝的に蛍光ラベルしたミトコンドリアを持つ細胞株を用いる。この実験系により、ミトコンドリアを受け取った細胞と受け取らなかった細胞をフローサイトメーターを用いて分別することが可能になり、それぞれのトランスクリプトームを網羅的に解析して、ミトコンドリア移送開始の契機となるシグナルを探求する。令和４年度は、予備実験としてDsRed、mCherry、TurboRFP、mKOkの４種類の異なる赤色蛍光タンパクのミトコンドリアへの移送とラベル効率について検討した。その結果、一般的によく使われている Discosoma sp由来の赤色蛍光タンパク（DsRed、mCherry）は細胞内において凝集塊を作成する傾向があるため、本研究においては偽陽性をきたす可能性があるという知見を得た。また、予備的にフローサイトメーターを用いて分別した細胞のRNAseq解析を行い差次的遺伝子発現の解析を行っている。

本研究の目的は、ミトコンドリアの細胞間水平移動のメカニズムについて、特にミトコンドリアの移動がどのように開始されるのかについて解明し、細胞間コミュニケーションを制御するための知見を得ることである。これにより、がん細胞の耐性獲得の阻止や酸化ダメージを受けた組織の修復を目的とする新しい治療方法の開発が期待される。本研究では、レンチウイルスベクターを用いて遺伝的に蛍光ラベルしたミトコンドリアを持つ細胞株を用いる。この実験系により、ミトコンドリアを受け取った細胞と受け取らなかった細胞をフローサイトメーターを用いて分別することが可能になり、それぞれのトランスクリプトームを網羅的に解析して、ミトコンドリア移送開始の契機となるシグナルを探求する。令和４年度は、予備実験としてDsRed、mCherry、TurboRFP、mKOkの４種類の異なる赤色蛍光タンパクのミトコンドリアへの移送とラベル効率について検討した。その結果、一般的によく使われている Discosoma sp由来の赤色蛍光タンパク（DsRed、mCherry）は細胞内において凝集塊を作成する傾向があるため、本研究においては偽陽性をきたす可能性があるという知見を得た。また、予備的にフローサイトメーターを用いて分別した細胞のRNAseq解析を行い差次的遺伝子発現の解析を行っている。