Development of a diagnostic technique using novel high-sensitivity expression analyses for secondary prevention against pancreatic and renal tumors

早期発見や再発の早期検知に有効な診断法がない癌腫は多く、浸潤性膵管癌（以下「膵癌」）と腎細胞癌（以下「腎癌」）はその代表例である。本研究は、自覚症状に乏しいこれらの癌の二次予防に向けた診断技術の開発を目的としている。我々は、患者の手術検体組織と末梢血検体で、包括的高感度転写産物プロファイリング(HiCEP)法と次世代シーケンシング (NGS)を組み合わせた新規高感度解析法を行うことにより、膵癌や腎癌に特異的な分子探索を行ってきた。HiCEP法は、本邦発の遺伝子発現解析技術であり、ATGCの4塩基全ての組み合わせ(4の4乗＝256通り)に相当する256対のプライマーを用いてcDNAを網羅的に増幅したもの（“HiCEPフラグメント”と呼ばれる）から、高感度に、かつ漏れなくmRNAの発現量を鋭敏に測定する技術である。これまで膵癌は約90症例、腎癌は約100症例を収集することができており、うち膵癌、腎癌とも6症例分についてHiCEPフラグメントの作成が完了した。この結果とNGS法から、長短を問わない全発現分子を分子疫学的手法により網羅的にカタログ化・データベース化し、病期診断や病理診断、治療効果等の臨床データとの関連を解析・検討し、膵癌及び腎癌から非癌部組織と比較して発現量が大幅に増加する未知の遺伝子を複数個同定し、他の症例検体でも再現できたことから、この手法の開発についての論文を現在準備中である。なお、このNGS-HiCEP法の限界は、NGSではHiCEPフラグメントのうち、400塩基対程度までのcDNAしか検出できなかった点にある。しかし、NGSの性能上昇に伴い、600塩基対程度までの長いDNAを読むことが最近可能となった。申請者らはこの技術を用いて、今後、長短いずれのHiCEPフラグメントについても発現量のデータベース解析ができる診断技術の開発も目指してゆく。

早期発見や再発の早期検知に有効な診断法がない癌腫は多く、浸潤性膵管癌（以下「膵癌」）と腎細胞癌（以下「腎癌」）はその代表例である。本研究は、自覚症状に乏しいこれらの癌の二次予防に向けた診断技術の開発を目的としている。我々は、患者の手術検体組織と末梢血検体で、包括的高感度転写産物プロファイリング(HiCEP)法と次世代シーケンシング (NGS)を組み合わせた新規高感度解析法を行うことにより、膵癌や腎癌に特異的な分子探索を行ってきた。HiCEP法は、本邦発の遺伝子発現解析技術であり、ATGCの4塩基全ての組み合わせ(4の4乗＝256通り)に相当する256対のプライマーを用いてcDNAを網羅的に増幅したもの（“HiCEPフラグメント”と呼ばれる）から、高感度に、かつ漏れなくmRNAの発現量を鋭敏に測定する技術である。これまで膵癌は約90症例、腎癌は約100症例を収集することができており、うち膵癌、腎癌とも6症例分についてHiCEPフラグメントの作成が完了した。この結果とNGS法から、長短を問わない全発現分子を分子疫学的手法により網羅的にカタログ化・データベース化し、病期診断や病理診断、治療効果等の臨床データとの関連を解析・検討し、膵癌及び腎癌から非癌部組織と比較して発現量が大幅に増加する未知の遺伝子を複数個同定し、他の症例検体でも再現できたことから、この手法の開発についての論文を現在準備中である。なお、このNGS-HiCEP法の限界は、NGSではHiCEPフラグメントのうち、400塩基対程度までのcDNAしか検出できなかった点にある。しかし、NGSの性能上昇に伴い、600塩基対程度までの長いDNAを読むことが最近可能となった。申請者らはこの技術を用いて、今後、長短いずれのHiCEPフラグメントについても発現量のデータベース解析ができる診断技術の開発も目指してゆく。