Development of a diagnostic technique using novel high-sensitivity expression analyses for secondary prevention against pancreatic and renal tumors

使用新型高灵敏度表达分析开发诊断技术，用于胰腺和肾肿瘤的二级预防

基本信息

批准号：
22K19679
负责人：
中山昌喜
金额：
$ 4.16万
依托单位：
National Defense Medical College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-06-30 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

早期発見や再発の早期検知に有効な診断法がない癌腫は多く、浸潤性膵管癌（以下「膵癌」）と腎細胞癌（以下「腎癌」）はその代表例である。本研究は、自覚症状に乏しいこれらの癌の二次予防に向けた診断技術の開発を目的としている。我々は、患者の手術検体組織と末梢血検体で、包括的高感度転写産物プロファイリング(HiCEP)法と次世代シーケンシング (NGS)を組み合わせた新規高感度解析法を行うことにより、膵癌や腎癌に特異的な分子探索を行ってきた。HiCEP法は、本邦発の遺伝子発現解析技術であり、ATGCの4塩基全ての組み合わせ(4の4乗＝256通り)に相当する256対のプライマーを用いてcDNAを網羅的に増幅したもの（“HiCEPフラグメント”と呼ばれる）から、高感度に、かつ漏れなくmRNAの発現量を鋭敏に測定する技術である。これまで膵癌は約90症例、腎癌は約100症例を収集することができており、うち膵癌、腎癌とも6症例分についてHiCEPフラグメントの作成が完了した。この結果とNGS法から、長短を問わない全発現分子を分子疫学的手法により網羅的にカタログ化・データベース化し、病期診断や病理診断、治療効果等の臨床データとの関連を解析・検討し、膵癌及び腎癌から非癌部組織と比較して発現量が大幅に増加する未知の遺伝子を複数個同定し、他の症例検体でも再現できたことから、この手法の開発についての論文を現在準備中である。なお、このNGS-HiCEP法の限界は、NGSではHiCEPフラグメントのうち、400塩基対程度までのcDNAしか検出できなかった点にある。しかし、NGSの性能上昇に伴い、600塩基対程度までの長いDNAを読むことが最近可能となった。申請者らはこの技術を用いて、今後、長短いずれのHiCEPフラグメントについても発現量のデータベース解析ができる診断技術の開発も目指してゆく。

许多癌没有有效的诊断方法来早期检测或早期发现复发，侵入性胰腺导管癌（以下称为“胰腺癌”）和肾细胞癌（以下简称“肾癌”称为“肾癌”）。这项研究旨在开发旨在预防这些癌症的诊断技术，这些癌症几乎没有主观症状。我们通过执行一种新型的高敏性分析方法进行了针对胰腺和肾脏癌的分子搜索，该方法将综合的高敏性转录分析（HICEP）方法与对患者手术样品组织和外围血液标本的下一代测序（NGS）结合在一起。 HICEP方法是一种源自日本的基因表达分析技术，是一种使用256对引物的技术，与ATGC的所有四个碱基相对应（4 = 4 = 4th power = 256方法），以高灵敏度且无泄漏来测量mRNA表达水平。到目前为止，已经收集了大约90例胰腺癌和大约100例肾癌病例，并且已经完成了六例，包括胰腺癌和肾癌。 Based on this result and the NGS method, all expressed molecules, both long and short, are comprehensively cataloged and databased using molecular epidemiological methods, and the relationship between staging, pathological diagnosis, and treatment effects was analyzed and examined, and multiple unknown genes with significantly increased expression levels compared to non-cancerous tissues from pancreatic and renal cancer, and were able to be reproduced in other case specimens, so目前正在准备有关此方法开发的论文。这种NGS-HICEP方法的局限性在于，在NGS中，仅检测到HICEP片段的cDNA，最多可达约400个碱基对。但是，随着NGS性能的提高，最近可以读取长达600个碱基对的长DNA。使用这项技术，申请人还将旨在开发诊断技术，以分析将来长长和短的hicep片段的表达水平。