Exploration of motility control of innate immune cells by utilizing their oxygen response characteristics

利用先天免疫细胞的氧反应特性探索其运动控制

• 批准号: 22K19887
• 负责人: 船本 健一
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-06-30 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K19887/
• 关键词: マイクロ・ナノデバイス; 細胞・組織; 生物・生体工学; 自然免疫細胞; 酸素応答; 低酸素; 好中球; マクロファージ

細胞周囲の酸素濃度・力学的刺激・化学的刺激を制御できるマイクロ流体デバイスを用い、酸素濃度に応じた自然免疫細胞の形態と動態を観察する実験に取り組んだ。本デバイスは、3本の分離したメディア流路の直上に2本のガス流路を設置した2層構造を有し、ガス流路に酸素濃度を調整した混合ガスを供給することで、メディア流路内に任意の酸素濃度の一様な状態や酸素濃度勾配を10分以内に生成できる。細胞実験には、白血球のモデル細胞としてヒト全骨髄球性白血病細胞株（HL-60）を用いた。RPMI-1640培養液に熱非働化済ウシ胎仔血清とペニシリン・ストレプトマイシン（P/S）を添加した培養液を用い、HL-60細胞をディッシュ上で培養した。その後、P/Sを添加していない上述の培養液にall-trans-レチノイン酸（ATRA）を分化誘導試薬として添加し、さらに培養を継続することでHL-60細胞を好中球様に分化させた。P/Sの有無やATRAの濃度、培養日数については予備的検討を行い、1μMのATRAを添加して5日間培養することにした。好中球様に分化したHL-60細胞を回収して各メディア流路に注入して接着させ、そのデバイスを顕微鏡上のステージインキュベーター内に設置した。酸素濃度0%と21%の混合ガスを、左右のガス流路に供給することでメディア流路に沿う方向に酸素濃度勾配を生成したり、両方のガス流路に供給することで一様な酸素濃度の状態を生成したりして、細胞のタイムラプス観察を行った。その結果、細胞が遊走する様子が観察され、実験開始から1時間後に細胞の遊走が活発化した。酸素濃度勾配下の遊走は、高酸素側と低酸素側で顕著な差異はなく、酸素濃度勾配に沿った遊走の方向性（走気性）も見られなかった。一方、酸素濃度が極めて低い環境では、遊走速度が減少する様子が観察され、酸素濃度によって動態が変化することがわかった。

Cells weeks 囲 の acid element concentration, mechanical stimulation, chemical stimulation を suppression で き る マ イ ク ロ fluid デ バ イ ス を い, acid element concentration に 応 じ た と の natural immune cells form dynamic を 観 examine す る be 験 に group take り ん だ. This デ バ イ ス は, 3 this の separation し た メ デ ィ ア flow の straight に 2 this の ガ ス flow を set し た を し, two layer structure ガ ス flow に acid levels を adjustment し た mixed ガ ス を supply す る こ と で, メ デ ィ ア flow に arbitrary の の acid element concentration within a others な state hook with や acid element concentration を に within 10 points generated で き る. Cell experiments: に に, white blood cells: モデ てヒト cells: と <s:1> てヒト whole bone myeloid leukemia cell line (HL-60) : を た た. RPMI - 1640 culture に hot non-literary 働 済 ウ シ tire seed serum と ペ ニ シ リ ン · ス ト レ プ ト マ イ シ ン (P/S) を add し を た broth with い, HL 60 cells を デ ィ ッ シ nurturing で ュ し た. そ の, P/S を after adding し て い な い に の cultures of above all - trans - レ チ ノ イ ン acid (ATRA) を induction try 薬 と し て add し, さ ら に cultivate を 継 続 す る こ と で を good - HL 60 cells in others に differentiation さ せ た. P/S の presence of や ATRA の concentration, training days に つ い て は of reserve 検 を い, 1 mu M の ATRA を add し て 5 day training す る こ と に し た. Good in others に differentiation し た - HL 60 cells を back 収 し て each メ デ ィ ア flow に injection し て then さ せ, そ の デ バ イ ス を 顕 micro mirror の ス テ ー ジ イ ン キ ュ ベ ー タ ー し に set inside た. Acid, concentration of 0% 21% と の ガ ス を, left and right sides is の ガ ス flow に supply す る こ と で メ デ ィ ア flow に に acid levels tick along う direction with を generated し た り, struck の ガ ス flow に supply す る こ と で a others な acid levels の state を generated し た り し て, cell の タ イ ム ラ プ ス 観 examine を line っ た. そ の results, cell が す る others child が 観 examine さ れ, be 験 began か ら の に cells after 1 time wandering が live 発 change し た. Acid levels under the hook with の wander は, high acid side と low acid element side で 顕 な difference between は な く, concentration of acid, hook with に along っ た wander の directional (go 気) も see ら れ な か っ た. Party, acid element concentration が め て low い で は, traveling speed が reduce す る others child が 観 examine さ れ, acid concentration に よ っ て dynamic が variations change す る こ と が わ か っ た.

项目成果

Observation of neutrophil-like HL-60 cell motility under oxygen gradient

氧梯度下中性粒细胞样HL-60细胞运动的观察

• 发表时间: 2022
• 作者: Masashi Tomita;Satomi Hirose;Kenichi Funamoto
• 通讯作者: Kenichi Funamoto