インフルエンザウイルスの新規受容体同定と細胞内侵入機構の解明

流感病毒新型受体的鉴定及细胞侵袭机制的阐明

• 批准号: 22K19240
• 负责人: 村上 晋
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-06-30 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K19240/
• 关键词: A型インフルエンザウイルス; 受容体; インフルエンザウイルス

A型インフルエンザウイルスの細胞内侵入機構は、ウイルス表面のヘマグルチニン(HA)が細胞表面糖鎖の末端にあるシアル酸受容体介して感染する経路が知られている。我々はこれまでに、シアル酸ノックアウト細胞を作製し、様々なインフルエンザウイルスを感染させると、ウイルスが増殖することを明らかにした。この結果はインフルエンザウイルス感染にはシアル酸非依存的な細胞内侵入機構の存在を示唆している。そこで、本研究ではこのインフルエンザウイルスの未知受容体をゲノムワイドスクリーニング等で同定し、インフルエンザウイルスの新規細胞内侵入機構を解明することを目的とした。本年度は、シアル酸ノックアウト細胞を用いてCRISPR/Cas9法によるゲノムワイドスクリーニングした。まずVero細胞のシアル酸トランスポーターSLC35A1をノックアウト（KO）した細胞を作製した。この細胞にレンチウイルスベクターでgRNAライブラリーを導入し、ランダムノックアウトした細胞ライブラリーを作製した。次にシアル酸KO細胞馴化ウイルス感染させ、耐性化した細胞を選択した。さらに耐性化細胞にインテグレートされているgRNAを次世代シーケンサーで網羅的に解析した。このスクリーニングを2回実施した。その結果、それぞれ12、20個の遺伝子が同定された。それぞれ上位の6個の遺伝子について、改めてgRNAを設計した。今後はこれら遺伝子のKO細胞を作製し、耐性化のメカニズムを解明する予定である。

The intracellular invasion mechanism of type A protein is known to be the end of the cell surface glycan receptor mediated infection pathway. We have a lot of questions about how to control cell types, how to control cell types, and how to control cell types. The results showed that the presence of an acid-independent intracellular invasion mechanism was not detected in the infected cells. The aim of this study is to identify new intracellular invasive mechanisms for unknown receptors. This year, the CRISPR/Cas9 method was used to analyze the data of different cell types. Vero cells are controlled by SLC35A1. This cell type is controlled by the introduction of RNA into the cell type. The second is to acclimate KO cells to infection and tolerance. In this case, the tolerance of the cell line was analyzed by the next generation of gRNA The first two days of the game. The results were 12 and 20 times the same. The six genes in the upper part of the genome are designed to change the gRNA. In the future, the KO cells of the virus will be controlled, and the tolerance will be determined.