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ゴルジ体とTGNのアイデンティティを構築するメカニズムの解明

阐明确定高尔基体和 TGN 身份的机制

基本信息

批准号：
22K19327
负责人：
植村知博
金额：
$ 4.16万
依托单位：
Ochanomizu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-06-30 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K19327/
关键词：
膜交通シロイヌナズナゴルジ体

项目摘要

真核生物の細胞内に存在する単膜系オルガネラ間の輸送は、膜交通と呼ばれる輸送システムによって厳密に制御されている。トランスゴルジ網（TGN）は、ゴルジ体以降の目的地に運ばれる積荷タンパク質の選別をおこなう重要なオルガネラである。我々は、植物細胞を用いた超解像ライブイメージング観察により、「TGNはゴルジ体とは異なるアイデンティティを有したオルガネラである」ことを見出している。in silicoの解析から同定したSyntaxin6 N-terminalドメインとTMDをもつがSNAREドメインをもたない非常にユニークな因子をSyntaxin 6-like protein in vascular plant (SYLK)と名付けた。SYLKはゴルジ体に局在し、SYP61はTGNに局在する。本研究課題では、両因子を比較解析することで、ゴルジ体とTGNの境界がどのように構築されるのかという謎に迫ることを目的とする。ⅰ．細胞内局在を制御する因子の単離：SYLK3とSYP6のそれぞれのドメインを交換し、GFPを融合させた6種類のキメラタンパク質を発現する形質転換植物を作出した。SYP61プロモーターでそれらの発現を制御することでどの組織でも発現が確認できた。ⅱ．ゴルジ体とTGNの境界に局在するタンパク質の探索：TurboIDを用いて、ゴルジ体とTGNの境界に局在する因子を網羅的に取得するためのコンストラクト作成のための準備をおこなった。ⅲ．SYLK変異体の作出：シロイヌナズナにはSYLK1-3までの３遺伝子存在する。T-DNAが挿入されたシロイヌナズナはSYLK1のみであったため、SYLK2およびSYLK3のノックアウト変異体をゲノム編集により作出した。SYLK1-3までの単独変異体では、目立った表現型は観察されなかった。そこで、交配により二重変異体および三重変異体を作出した。

In eukaryotes, there are membrane systems, membrane systems, and membrane traffic systems. Please make sure that you do not need to pay attention (TGN) or health in order to lower your destination. Please make sure that you do not want to choose any important information. The plant cell is used to observe the situation, and the plant cell is used to observe the situation, and the plant cell is used to observe the situation, and the plant cell is used to observe the situation. In silico parses the same definition, Syntaxin6 N-terminal, TMD, SNARE, SNARE, Syntaxin6-like protein in vascular plant (SYLK), name payment. The SYLK sports bureau is in the sports department and the SYP61 TGN office is in the sports department. In this study, the problems and factors are compared and analyzed. In this study, there is a difference between the analysis and the analysis of the problem, the factor and the situation in this study. in this study, the problems and factors in this study are compared with each other in this study. in this study, the problems and factors in this study are compared with each other in this study. I. The intracellular system is responsible for the control of environmental factors: SYLK3, SYP6, SYLK3, SYP6, GFP, SYLK3, SYP6, SYLK3, SYP6, SYLK3, SYP61 will ensure that you are able to make sure that your organization has confirmed that you are in trouble. II. In order to improve the performance of the system, the TGN realm Bureau is trying to explore: the TurboID system uses the system, the system, and the TGN realm Bureau to obtain information on the Internet. III. The SYLK body makes the following statement: please tell me that there is a SYLK1-3 spool. T-DNA