Development of antibody-mimetic libraries by CDR grafting

通过CDR移植开发抗体模拟文库

• 批准号: 22K19376
• 负责人: 野中 元裕
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-06-30 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K19376/
• 关键词: Nanobody; 抗体; CDR; ファージディスプレイ

バイオ製剤の投与で体内にて抗薬物抗体が生成されることにより、薬効の低下や予期せぬ副作用などの二次無効化現象が生じることがある。これまで申請者らは、全ての配列がD-アミノ酸で作られた「鏡像低分子化抗体」がマウスモデルにおいてほとんど免疫原性を示さないことが明らかにしてきた。一方、これまで申請者らは、ファージディスプレイ法にて用いた人工ランダム配列ライブラリーでは、結合活性を持つ鏡像抗体のヒット配列を効率良く得ることが困難であった。そこで本研究では、マウスに標的D-タンパク質を免疫し、得られた抗体の超可変領域の配列をNanobody/Monobodyへ移植することを目的とした検討を実施した。ヒット配列を効率的に取得できるようになることで、免疫原性を示さないモダリティの実現に近づけることが期待される。本年度では、ケモカインMCP-1をモデルとして、BALB/cマウスにおいて鏡像MCP-1のフラグメント5種類を用いた免疫を実施した。D-ペプチド単体では抗体価が上がらないことが予想されたため、KLHとのコンジュゲートを用いた。BALB/cマウスに単回腹腔内投与を行った14日後に、血漿を回収し、抗体価を測定した。その結果、C末端領域を含む3種類のD-ペプチドに対しては抗体価の上昇が認められたが、対応するL-ペプチドでは抗体価はほとんど認められなかった。以上の結果から、マウスにおいてD-ペプチドに対する抗体を誘導することが可能であることが明らかとなった。現在、マウスからB細胞を単離し、免疫ライブラリーを作製中であり、今後、マウスIgGのCDR3をNanoody超可変領域に組込んだファージライブラリーを作製する予定である。

Anti-drug antibody production in vivo due to the administration of anti-drug drugs, the decrease of anti-drug effect, and the occurrence of secondary non-drug effect. This is the first time that the applicant has been assigned a D-amino acid sequence, which is used as a mirror image of a low molecular weight antibody. One party, the applicant, the application method, the use of artificial selection, the binding activity, the maintenance of mirror antibody, the selection of the application method, the success rate, the difficulty, the difficulty, The aim of this study is to obtain a D-type antibody and a D-type antibody. The results of the study showed that the expression of the protein was significantly lower than that of the control group. This year, the MCP-1 gene was used to immunize BALB/C mice. D-list is available for all types of applications. BALB/c was administered intraperitoneally and plasma was collected 14 days later. As a result, the C-terminal domain contains three types of D-peptide, and the L-peptide has three types of D-peptide, and the L-peptide has three types of D-peptide. The above results show that there is no difference between the two. Now, it's time for B cell isolation, immune response, and future Nanoody CDR3.

项目成果

鏡像VHH抗体の免疫原性評価と免疫ライブラリーを用いた配列取得

镜像VHH抗体的免疫原性评估和使用免疫文库的序列采集

• 发表时间: 2022
• 作者: 眞鍋麻彩子;前田佳夕;青木啓輔;薄井友輔;髙橋里菜;大野浩章;森瀬譲二;岡昌吾;大石真也;野中元裕
• 通讯作者: 野中元裕

Investigation of the immunogenicity of mirror-image single-domain antibody binding to vascular endothelial growth factor

镜像单域抗体结合血管内皮生长因子的免疫原性研究

• 发表时间: 2022
• 作者: Keisuke Aoki;Motohiro Nonaka;Sakiho Oda;Katsuaki Higashi;Asako Manabe;Shinsuke Inuki;Hiroaki Ohno;Shinya Oishi
• 通讯作者: Shinya Oishi

創薬モダリティとしての応用を指向した鏡像モノボディの化学合成法の確立と応用

镜像单体化学合成方法的建立和应用，旨在作为药物发现方式

• 发表时间: 2023
• 作者: 佐藤志乃;岩本直也;眞鍋麻彩子;井貫晋輔;大野浩章;野中元裕;大石真也
• 通讯作者: 大石真也

鏡の中の中分子化合物からの医薬シーズの探索技術

镜中中分子化合物寻找药物种子技术

• 发表时间: 2023
• 作者: 小島摩利子;安部聡;上野隆史;大石真也
• 通讯作者: 大石真也

Synthesis and functional analysis of mirror-image monobody

镜像单体的合成与功能分析

• 发表时间: 2022
• 作者: Naoya Iwamoto;Yukino Sato;Asako Manabe;Shinsuke Inuki;Hiroaki Ohno;Motohiro Nonaka;Shinya Oishi
• 通讯作者: Shinya Oishi