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老化マーカー蛋白質SMP30欠損マウス作製による生理機能の解明

通过创建缺乏衰老标记蛋白 SMP30 的小鼠来阐明生理功能

基本信息

批准号：
08838036
负责人：
藤田敬子
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Institute of Gerontology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は、加齢に伴って肝臓で減少してくる新しいカルシウム結合性肝臓蛋白質を発見しSMP30と命名し研究を進めている。その生理機能として細胞内カルシウム濃度のホメオスターシスやカルシウムシグナリングに関与することが示唆されている。本年度は昨年度構築できたターゲテイングベクターをES細胞へ導入し選別を行った(他研究機関で行った)。ES細胞の選別はまず第一にPCR法でスクリーニングし次にサザン解析で確認する方法をとった。しかしフォールスポジテイブを多く拾う結果になったので戦略を変更し直接サザン解析を行った。そのために効率のよいと考えられるよりホモロ-ガス部位の長いターゲテイングベクターをES細胞へ導入し選別を行なった。517クローンをサザン解析した結果3コのポジテイブクローンが得られた。現在、このES細胞を胚盤胞に注入し仮親の子宮で発生生育させ順調にキメラマウスが誕生している(他研究機関で行っている)。SMP30遺伝子の発現調節機構の解析のために本年度はマウスSMP30遺伝子の転写開始位置の決定をプライマー・エクステンション法によって転写開始位置を決定した。さらに5'-フランキング領域の遺伝子配列の決定し推定プロモタ-、エンハンサー配列、転写調節因子結合配列を特徴ずけることができた。

I am a new member of the team, adding a new type of hepatic stasis protein, a new stagnant protein, SMP30, and a new name for the research.そのphysiological function として intracellular concentration of カルシウムのホメオスターシスThe やカルシウムシグナリングに关 and the することが世憆されている. This year and last year, we built the ES cell introduction system (hereinafter referred to as the research institute). The selection of ES cells is based on the first PCR method and the analysis and confirmation method.しかしフォールスポジテイブを多くpickうRESULTSになったので戦肖を変changeしDirect サザンanalytic を行った.そのためにefficiencyのよいと卡えられるよりホモロ-ガス PARTの长いターゲテイングベクターをES cells are imported and selected. 517クローンをサザンANALYSISしたRESULTS3コのポジテイブクローンがGETられた. Now, the ES cells and the blastoderm cells are injected into the uterus of the uterus and the birth is born. Analysis of the adjustment mechanism of SMP30's remaining parts The writing start position is decided by the method of writing the starting position.さらに5'-フランキング区の缝子arrayのdeterminationし Presumptionプロモタ-, The combination of the エンハンサー arrangement and the 転WRITING adjustment factor combination arrangement を特徴ずけることができた.