食物中の有害物質タンニンの無毒化に関わるタンパク質の研究

食品中有害物质单宁解毒相关蛋白质的研究

基本信息

批准号：
13J40192
负责人：
土原和子
金额：
$ 2.76万
依托单位：
Forestry and Forest Products Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

・昨年度タンニンとの結合を確認した候補タンパク質のうちN末端がブロックされていた3種タンパク質の構造決定する為に酵素消化して解析した。酵素で切断して質量分析（MARDI-TOF-MASS）をおこなったところ、３種類とも全く別の解析パターンを示したが、タンニン結合性候補タンパク質Proline Rich Proteins (PRPs)と相同性があったのは、静岡産の2サンプルであった。また、メインの分画であるアカネズミ（盛岡産）30kDとアカネズミ（静岡産）30kDのタンパク質を酵素消化してアミノ酸シークエンスをおこなった。その結果、タンニン結合タンパク質ではなかった。・森林げっ歯類のうち、ドングリ食であるアカネズミ、ドングリ食と草食の混合食であるヒメネズミ・シマリス・ニホンリス、樹皮を主とする草食のエゾヤチネズミ、完全草食のハタネズミの６種の唾液からタンパク質を抽出単離して、PRPs量の測定、およびSDS-PAGEによる分画と、その分画のタンパク質の精製をおこなった。その結果、PRPsの含有量が最も多かったのは混合食であるヒメネズミで、その次はドングリ食のアカネズミ、そして混合食のシマリス・ニホンリス、そして最も少なかったのは、草食性のエゾヤチネズミ・ハタネズミであった。この結果は、食餌と唾液中のPRPs量との相関はリーズナブルであったといえるが、完全ドングリ食のアカネズミより混合食のヒメネズミのPRPs量が多いのは予想外であった。また、草食性のエゾヤチネズミ・ハタネズミの唾液中にもかなりのPRPsを含んでいたことより、以前はこの２種もタンニンを含むドングリ等を食べていた可能性が高いが、現在は必要なくなったといえる。このように森林性齧歯類は、基本的にはタンニン結合タンパク質であるPRPsを唾液中にもっており、現在ではそれぞれの生活様式にあわせて食餌を変化させてきたといえる。

通过酶消化进行分析，以确定去年确认与单宁结合的三种候选蛋白的结构，而N-末端被阻断。当用酶裂解（Mardi-Tof-Mas）进行质谱时，所有三种类型的分析模式都完全不同，但是Shizuoka的两个样品是与脯氨酸富蛋白（PRPS）的同源性，这是一种候选的单宁结合蛋白。此外，通过酶消化30kD红色小鼠（Morioka）和30kD红色小鼠（Shizuoka）的主要部分（Shizuoka）来进行氨基酸序列。结果表明它不是单宁结合蛋白。 - 从六种唾液中提取并分离蛋白质：红色老鼠，橡子饮食，橡子和草食动物的混合饮食，日本百合，草食动物，基于树皮的草食动物以及完全的草食动物以及PRP，以及通过SDS-PAGE和SDS-PAGE和序列的蛋白质测量的PRP。结果，最高的PRP是混合饮食，西伯利亚小鼠，其次是基于橡子的红鼠，其次是混合饮食，花栗鼠和日本日本松鼠，最低的是草食性草食田鼠。该结果表明，饮食与唾液之间的相关性是合理的，但是意外的是，混合粉中的PRP量高于完全吃橡子的红色小鼠。此外，由于草食性蕨类植物和田鼠的唾液也包含相当数量的PRP，因此这两个物种以前吃了橡子和其他单宁，但可以说不再需要它们。通过这种方式，森林啮齿动物基本上携带PRP，是一种唾液中的单宁结合蛋白，现在可以说已经改变了饮食以适应其生活方式。