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ヒスタミンをリアルタイムに可視化する新規蛍光プローブの開発

开发用于实时观察组胺的新型荧光探针

基本信息

批准号：
13J03865
负责人：
押川祐二
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J03865/
关键词：
ヒスタミン蛍光プローブ免疫細胞脱顆粒イメージング

项目摘要

前年度までにヒスタミンに応答するためのリガンドと金属イオンに関して検討し、プローブ設計の一定の指針を得た。当該年度は、色素変換によるさらなるスクリーニングとイメージングを行なった。クマリンでの検討では、Ida型のプローブを4種合成し、常磁性金属を用いて金属錯体を得た。これに対し種々の滴定剤を加える事で、その蛍光応答を評価した。その結果、合成したプローブのうち2種類において、ヒスタミン非存在下では消光し、ヒスタミンを加えると、金属の脱離に伴う蛍光強度は上昇が見られた。そこで、クマリンで得たリガンド構造を、近赤外蛍光を有するCy5に導入し、評価した。その結果、Idaとメトキシ基をCy5に導入し、コバルトを用いた場合、良好なヒスタミン応答が得られた。選択性に関してはヒスタミン高選択性ではないが、脱顆粒時の濃度差によりセンシングができると考えられた。次に、細胞での応用を目指して誘導体化の検討を行った。免疫細胞の顆粒に高度に蓄積されたヒスタミンは、脱顆粒により放出されるが、細胞顆粒の体積に比べ大きな培地に拡散されると、濃度差を活かしたセンシングは困難となる。そこで、親水性のPEG180と、疎水性のオレイン酸部位からなるポリマーを蛍光プローブに導入することにより、蛍光プローブが細胞膜上に固定され、脱顆粒によって放出されたヒスタミンが拡散される前にセンシングすることが期待した。実際にポリマーを導入した蛍光プローブを合成し、肥満細胞モデル細胞として知られるRBL-2H3細胞を用いて、その機能を評価した。外因性のヒスタミンに応答することを確認した後、脱顆粒モデル実験を行った。カルシウムイオノフォアと、抗原抗体反応による脱顆粒刺激を行なった場合、いずれの場合においても蛍光強度の上昇が確認できた。このことからヒスタミン放出のリアルタイムな可視化に成功したと考えている。

In the past year, we have obtained some guidelines for the design of metal products. When the year is over, the pigment changes, and the pigment changes, the pigment changes, and the pigment changes. 4 kinds of synthetic and permanent-magnetic metal complexes were obtained. This is the first time I've ever seen a person who's been titrated. As a result, the light intensity increases in the absence of light and light, and the light intensity increases in the absence of light. At this time, the introduction and evaluation of Cy5, which has a compact structure and near-infrared external light. All results, Ida, Cy 5, Cy 6, Cy 7, Cy 8, Cy 9, Cy 9, Cy 9, The selectivity is related to the concentration difference between the particles and the particles. The study of induction of somatic cells in vitro was carried out. The accumulation of immune cells is highly dependent on the size of the cells and the concentration of the cells. For example, hydrophilic PEG 180, hydrophilic PEG 180, hydrophilic In the meantime, the function of RBL-2H3 cells was evaluated. After confirming that the external cause of vibration was detected, the degranulation process was carried out. The increase in the intensity of light is confirmed in the case of antigen-antibody reaction and degranulation stimulation. This is the first time I've seen this.