膵β細胞の成熟・機能維持における大Ｍａｆ転写因子群の役割

大Maf转录因子在胰腺β细胞成熟和功能维持中的作用

基本信息

批准号：
13J00759
负责人：
越田隆介
金额：
$ 1.92万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J00759/
关键词：
糖尿病膵β細胞大Maf転写因子群 MafA MafB Angiopoietin-like protein 7 CRISPR-Cas system

项目摘要

本研究では、大Maf転写因子群の1つであるMafAの、膵β細胞における標的遺伝子を探索した。そこで、angiopoietin-like protein 7 (ANGPTL7)をMafA標的遺伝子の有力候補とし、解析を行った。マウス膵β細胞株MIN6にMafAを強制発現すると、ANGPTL7発現の上昇が見られ、ANGPTL7がMafAの標的遺伝子であることが示唆された。さらにCRISPR systemを用い、ANGPTL7遺伝子の変異マウス（機能喪失型）の作製に成功した。ANGPTL7変異マウスを普通食で飼育し、耐糖能について野生型と比較したが、両者に明らかな差は見られなかった。大Maf転写因子群の1つであるMafBのin vivoの機能解析を行った。まず組織特異的Mafb遺伝子欠損マウスを作製し、膵β細胞におけるMafBの機能解析することを試みた。まずMafb遺伝子の上下流にloxP配列を挿入させたマウス（Mafb-floxedマウス）の作製に成功した。膵内分泌細胞で作動するCreマウスと交配させ、膵内分泌細胞でMafb遺伝子を欠損させた。すると、Mafbコンディショナル欠損マウスにおいて、膵α細胞とβ細胞の減少が見られ、代わりに非ホルモン産生細胞に置換されていた。以上の結果より、MafBが胎生期の膵α細胞とβ細胞への分化に重要であることが示された。本研究の派生として、ミクログリアにおけるMafBの機能解析を行い、MafBがGM-CSFシグナリングの抑制因子であることを明らかにした（Koshida et al., Biochem Biophys Res Commun. 2015）。またMafBが後脳脈絡叢の正常な発生に必要であることも明らかにした (Koshida et al, in submission)。

在这项研究中，我们探索了MAFA的胰腺β细胞中的靶基因，这是MAF的主要转录因子之一。因此，使用血管生成素样蛋白7（ANGPTL7）作为MAFA靶基因的潜在候选者，并进行了分析。 MAFA在小鼠胰腺β细胞系MIN6中的强迫表达显示ANGPTL7表达增加，这表明Angptl7是MAFA的靶基因。此外，使用CRISPR系统，我们成功地创建了ANGPTL7基因的突变小鼠（损失功能类型）。在正常饮食中饲养Angptl7突变小鼠，并与葡萄糖耐量的野生型相比，但两者之间没有明显的差异。 MAFB的体内功能分析是MAF的主要转录因子之一。首先，我们创建了组织特异性MAFB基因缺陷型小鼠，并试图分析MAFB在胰腺β细胞中的功能。首先，我们成功地创建了小鼠（MAFB-串联小鼠），其中LOXP序列被向上插入MAFB基因的下游。将细胞与胰腺内分泌细胞一起工作的CRE小鼠配对，MAFB基因缺乏胰腺内分泌细胞。这表明MAFB有条件缺陷的小鼠中胰腺α-和β细胞的减少，而是被非激素产生的细胞取代。以上结果表明，在胚胎阶段，MAFB对于分化为胰腺α细胞和β细胞很重要。这项研究的结果是对小胶质细胞中MAFB的功能分析进行了分析，并且发现MAFB是GM-CSF信号传导的抑制剂（Koshida等，Biochem Biophys Res Commun。2015）。还已经表明，MAFB是后脑脉络丛正常发育所必需的（Koshida等人，提交）。

项目成果

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Generation of insulin-producing cells from the mouse liver using β cell-related gene transfer including Mafa and Mafb.

DOI：
10.1371/journal.pone.0113022
发表时间：
2014
期刊：
PloS one
影响因子：
3.7
作者：
Nagasaki H;Katsumata T;Oishi H;Tai PH;Sekiguchi Y;Koshida R;Jung Y;Kudo T;Takahashi S
通讯作者：
Takahashi S

MafBは第4脳室脈絡叢の発生を調節する

MafB 调节第四脑室脉络丛的发育