权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

腸管寄生性原虫赤痢アメーバの貪食におけるＲａｂ依存的輸送機構の解明

阐明肠道寄生原生动物溶组织内阿米巴吞噬过程中 Rab 依赖性转运机制

基本信息

批准号：
13J00791
负责人：
花舘有希
金额：
$ 1.92万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J00791/
关键词：
Rab 膜輸送赤痢アメーバ貪食寄生虫 CDC50 小胞体 Rab GTPase 小胞輸送 Rab8 輸送

项目摘要

赤痢アメーバの Rab GTPase は、他種生物と比較して多様化していることが報告されており、貪食時のダイナミックな膜輸送に伴い独自に進化したことが示唆されている。昨年度までの成果から、赤痢アメーバの Rab8A (EhRab8A) が貪食に関与し、また、他種生物とは異なる小胞体への局在を示すことが明らかになった。本年度は、EhRab8A 結合タンパク質の同定とその機能解析について解析を行った。昨年度の研究成果から、EhRab8A が約30kDaと約40kDaのタンパク質と結合していることが示唆された。それぞれの分子量から切り出したサンプルを質量分析法により解析し、得られた EhRab8A 結合候補タンパク質の中から、5種類の脂質合成や脂質の輸送に関与するタンパク質を候補タンパク質として得た。それら5つについて、逆免疫沈降により EhRab8A との直接の結合を確認した結果、EhCDC50 (36kDa) が EhRab8A と結合していることを見出した。赤痢アメーバには CDC50 ホモログは一つしか存在しない。CDC50 は P4-ATPase の非触媒ユニットとして機能していることが他種生物で既に報告されており、細胞膜上におけるリン脂質のフリップを触媒するには触媒ユニットである P4-ATPase が必須である。in silico 解析により、赤痢アメーバにもほ乳動物と同数の11個の P4-ATPase ホモログが存在することがわかり、CDC50 と P4-ATPase が複合体を形成して機能している可能性が示唆された。また、EhCDC50 の局在を間接免疫蛍光染色法により解析したところ、EhRab8A と大部分が共局在し、一部それぞれ異なるコンパートメントに局在することがわかった。さらに、EhRab8A と同様に大部分が小胞体に共局在することもわかった。この結果から、EhCDC50 が細胞内で EhRab8A と類似の挙動を示しており、お互いが同じ輸送経路で相互作用していることが示唆された。

Rab GTase is a rare species that evolves independently of other organisms and is more diverse than other organisms. Rab8A (EhRab8A), which was found in the early part of the year, is related to gluttony and other organisms. This year, EhRab8A combined with the quality and stability of the functional analysis of the implementation of the analysis. Last year's research results showed that EhRab8A was about 30kDa and about 40kDa. The molecular weight of each sample was determined by mass spectrometry, and EhRab8A was selected as a candidate for lipid synthesis and lipid transport. EhRab 8A and EhCDC50 (36kDa) were identified by reverse immunoprecipitation. The CDC50 is the best way to get rid of the virus. CDC50 is a non-catalytic enzyme for P4-ATPase. It functions as a catalyst for P4-ATPase in other organisms. It is necessary for P4-ATPase to be reported to other organisms and to be a catalyst for lipid on cell membranes. In silico analysis, the same number of 11 P4-ATPase complexes exist in dairy animals, indicating the possibility of CDC50 and P4-ATPase complex formation. EhRab8A was found in most cases, but not in all cases. EhRab8A and EhRab8A are the same species. The result is that EhCDC50 cells interact with EhRab8A cells in a similar way.