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無顎類ヌタウナギにおける２種ビテロジェニン遺伝子の転写調節機構の解明

阐明无颌盲鳗中两个卵黄蛋白原基因的转录调控机制

基本信息

批准号：
13J01491
负责人：
西宮攻
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

一般に卵生脊椎動物の卵は、多量の卵黄を蓄積することを特徴とする。卵黄を構成する物質は、主にビテロジェニン（Vtg）と呼ばれる雌特異血清蛋白に由来する。そして、Vtgは、雌性ホルモンであるestradiol-17β（E2）の作用により肝臓で合成される。しかし、先行研究においてヌタウナギ（Eptatretus burgeri）では、Vtg遺伝子の発現は一般的な同遺伝子発現機構とは大きく異なる可能性が示された。そこで本研究ではヌタウナギにおけるVtg遺伝子の転写調節機構の解明を目的としており、本年度は以下の実験を行った。①ヌタウナギ肝臓片培養系を用いた2種Vtg遺伝子発現誘導実験本種の雄および成熟雌から得た肝臓片をE2（1 μM）添加した培養液、雌血清または成熟雄血清を含有した培養液を用いて1日または2日間培養した。培養後に各群の肝臓片中の2種Vtg遺伝子発現量をリアルタイム定量PCR法により測定した。その結果、両Vtg 遺伝子発現量は、何れの培養条件においても顕著な変化が認められなかった。本結果に加え、以前行ったin vivo実験においてもE2によるVtg遺伝子発現誘導が顕著に起こらなかったことから、ヌタウナギにおけるVtg遺伝子の発現制御はE2やエストロジェン受容体を介した経路を主要経路とせず、他のホルモンや転写調節因子等を介する可能性が強く示された。②Vtg合成に関わる転写調節因子の網羅的解析本種におけるVtg遺伝子の発現制御に関わる他のホルモンや転写調節因子等を探索するために、雌および雄の肝臓より得たmRNAを次世代シーケンサー（HiSeq 2000; illumina社）に供したトランスクリプトーム解析を試みた。その結果、Vtg遺伝子の発現に関わる因子の特定までには至らなかった。しかし、今後さらに解析を進める上での重要なコンティグデータベースを得ることができた。

Generally, に oviparous vertebrates have を eggs and a large amount of <s:1> yolk を accumulation するとを characteristics とする. Egg yolk を constitutes する substances する, main にビテロジェニにビテロジェニ (Vtg) と call ばれる female specific serum protein に origin する. そして, vacations は, female ホルモンである estradiol - 17 beta (E2) の role により routine liver で synthetic される. しかし, leading research においてヌタウナギ (Eptatretus burgeri) では, vacations but 伝の発 now はな with of general 伝 son 発 institutions now とは big きく different ながる possibility in された. そこで this study ではヌタウナギにおける vacations heritage 伝 son の planning write regulator の interpret を purpose としており, below this year's はの be 験を line った. 1) ヌタウナギ routine liver slice culture system を with いた traces of two vacations 伝 son 発 induction be now this kind of male の験および mature female からた liver viscera devastated を E2 mu (1 M) add した culture, female serum または mature male serum containing をしをた broth with いまて 1 たは 2 day training した. After culture, the occurrence amounts of 伝 of two types of Vtg residues in the <s:1> liver slices of each group をリア, <s:1> タ and ム were determined by quantitative PCR によ伝 and た respectively. その results, struck vacations heritage 伝は発 now quantity, any れの culture conditions においても顕 the な variations change が recognize められなかった. This result に plus え, with the previous row ったin Vivo be 験においても E2 による vacations heritage 伝 son 発 now induced が顕 since the にこらなかったことから, ヌタウナギにおける vacations heritage 伝 son の発 now suppression は E2 やエストロジェンを interface by let body した経を経 main road とせず, he のホルモンや planning write adjustment factor を interface する strong possibility がく shown された. (2) the vacations to synthetic に masato わる planning write adjustment factor の snare parsing the species における vacations heritage 伝 son の発 now suppression に masato わる he のホルモンや planning write adjustment factor を explore するために, female および male の is crucial liver より must た mRNA を nextgen シーケンサー (HiSeq 2000; illumina (に) provided by たトラたトラスリプトリプトムム analysis を try みた. The そ <s:1> result, Vtg legacy 伝 offspring <e:1> exhibit に related わる factors <e:1> specific to までに to らならなった. Analytical をしかし, future さらに into める on での important なコンティグデータベースを must ることができた.