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人工ヌクレアーゼを用いた標的遺伝子組換えメダカ作出技術の確立

利用人工核酸酶靶向基因重组青鳉生产技术的建立

基本信息

批准号：
13J01682
负责人：
安齋賢
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J01682/
关键词：
メダカゲノム編集 CRISPR/Cas TALEN ヌクレアーゼ標的遺伝子組換え CRISPR 相同組換え

项目摘要

DNAシークエンス技術の発達に伴い、ゲノム情報の整備が急速に進む中、個々の遺伝子の機能を個体レベルで詳細に解析するための逆遺伝学的手法の重要性は増大しつつある。本研究では、任意のゲノムDNAを切断可能な人工ヌクレアーゼを用いて、メダカでの胚における標的遺伝子組換え技術を確立することを目的とした。本年度は前年度に引き続き、CRISPR/Casシステムによる標的遺伝子組み換えの高効率化のための条件検討を行った。本研究では、骨格筋特異的に強く発現するOlMA1遺伝子への標的遺伝子組換えによるGFP遺伝子の導入をモデル実験として、導入効率の比較検討を進めた。始めに、特に再現性において問題となった部分として、ドナーDNAへのRNaseの混入、及び転写RNAへのDNaseの混入の2点について、それぞれProteinase処理の追加や精製キットの変更を行った。続いて、必要な各核酸の導入量や導入に用いるドナーベクター中の相同配列の長さ、相同配列を露出させるためのBait配列について、導入効率に及ぼす影響を比較検討し、ある程度効率的に標的遺伝子組換えを行うためのプロトコルを確立しつつある。現在、当初計画の通り、更なる相同組換え効率の上昇を期待して、DNA二重鎖切断修復に関わる分子の操作についても検討を進めている。

The development of DNA technology, the preparation of information, the rapid development of DNA technology, the function of DNA technology, the detailed analysis of DNA technology and the importance of genetic technology are increasing. This study aims to establish a novel DNA sequencing technique for the identification of DNA fragments that can be cut off at random. This year, compared with the previous year, CRISPR/Cas has been working on the development of high-efficiency technologies. In this study, we further investigated the expression of OLA1 gene and its target gene component, and the comparative study of GFP gene expression and its efficiency. There are two aspects of reproducibility problems at the beginning and in the specialty: the mixing of RNase into DNA and the mixing of DNase into RNA. Additional and refined changes to the Proteinase processing have been implemented. The amount of each nucleic acid to be introduced, the amount of each nucleic acid to be introduced, Now, the original plan is to increase the efficiency of the same component, and to improve the molecular operation of DNA double lock repair.

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

An essential role of the arginine vasotocin system in mate-guarding behaviors in triadic relationships of medaka fish (Oryzias latipes).

DOI：
10.1371/journal.pgen.1005009
发表时间：
2015
期刊：
PLoS genetics
影响因子：
4.5
作者：
Yokoi S;Okuyama T;Kamei Y;Naruse K;Taniguchi Y;Ansai S;Kinoshita M;Young LJ;Takemori N;Kubo T;Takeuchi H
通讯作者：
Takeuchi H

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