人工ヌクレアーゼを用いた標的遺伝子組換えメダカ作出技術の確立

利用人工核酸酶靶向基因重组青鳉生产技术的建立

• 批准号: 13J01682
• 负责人: 安齋 賢
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J01682/
• 关键词: メダカ; ゲノム編集; CRISPR/Cas; TALEN; ヌクレアーゼ; 標的遺伝子組換え; CRISPR; 相同組換え

DNAシークエンス技術の発達に伴い、ゲノム情報の整備が急速に進む中、個々の遺伝子の機能を個体レベルで詳細に解析するための逆遺伝学的手法の重要性は増大しつつある。本研究では、任意のゲノムDNAを切断可能な人工ヌクレアーゼを用いて、メダカでの胚における標的遺伝子組換え技術を確立することを目的とした。本年度は前年度に引き続き、CRISPR/Casシステムによる標的遺伝子組み換えの高効率化のための条件検討を行った。本研究では、骨格筋特異的に強く発現するOlMA1遺伝子への標的遺伝子組換えによるGFP遺伝子の導入をモデル実験として、導入効率の比較検討を進めた。始めに、特に再現性において問題となった部分として、ドナーDNAへのRNaseの混入、及び転写RNAへのDNaseの混入の2点について、それぞれProteinase処理の追加や精製キットの変更を行った。続いて、必要な各核酸の導入量や導入に用いるドナーベクター中の相同配列の長さ、相同配列を露出させるためのBait配列について、導入効率に及ぼす影響を比較検討し、ある程度効率的に標的遺伝子組換えを行うためのプロトコルを確立しつつある。現在、当初計画の通り、更なる相同組換え効率の上昇を期待して、DNA二重鎖切断修復に関わる分子の操作についても検討を進めている。

DNA シ ー ク エ ン ス technology の 発 に with い, ゲ ノ ム intelligence の servicing が に rapidly into む, a 々 の posthumous son 伝 の function を individual レ ベ ル で detailed analytical す に る た め の inverse importance but 伝 learn technique の は raised large し つ つ あ る. This study で は, arbitrary の ゲ ノ ム を cut DNA may な artificial ヌ ク レ ア ー ゼ を with い て, メ ダ カ で の embryo に お け る mark heritage 伝 subgroups in え technology を establish す る こ と を purpose と し た. This year's annual に lead before は き 続 き, CRISPR/Cas シ ス テ ム に よ る mark heritage 伝 subgroups み in え の high rate of unseen の た め 検 の conditions for line を っ た. This study で は, skeletal muscle specific に く 発 now す る OlMA1 posthumous son 伝 へ の mark heritage 伝 subgroups in え に よ る GFP heritage 伝 son の import を モ デ ル be 験 と し て, import の is beg を 検 into sharper rate め た. Beginning め に, に reproducibility に お い て problem と な っ た part と し て, ド ナ ー DNA へ の RNase の interfuse and び planning write RNA へ の DNase の の with 2 に つ い て, そ れ ぞ れ Proteinase 処 Richard の additional や refined キ ッ ト の line - more を っ た. 続 い て, necessary な nucleic acid の import quantity や import に with い る ド ナ ー ベ ク タ ー の in the same column の さ long, with columns を reveal さ せ る た め の Bait with column に つ い て, import, sharper rate に and ぼ す influence を beg し 検, あ る に mark of degree working rate 伝 subgroups in え を line う た め の プ ロ ト コ ル を establish し つ つ あ る. Now, original plan の り and more な る in same group え sharper rate rising の を expect し て and repair DNA double lock cut に masato わ る molecular の operation に つ い て も beg を 検 into め て い る.

项目成果

An essential role of the arginine vasotocin system in mate-guarding behaviors in triadic relationships of medaka fish (Oryzias latipes).

• DOI: 10.1371/journal.pgen.1005009
• 发表时间: 2015
• 期刊: PLoS genetics
• 影响因子: 4.5
• 作者: Yokoi S;Okuyama T;Kamei Y;Naruse K;Taniguchi Y;Ansai S;Kinoshita M;Young LJ;Takemori N;Kubo T;Takeuchi H
• 通讯作者: Takeuchi H

遺伝子改変メダカの行動特性解析のための行動テストバッテリーの開発

开发用于转基因青鳉鱼行为特征分析的行为测试电池

• 发表时间: 2014
• 作者: 安齋 賢;前川 真吾;木下 政人;細川 浩
• 通讯作者: 細川 浩

CRISPR/Casシステムを利用したメダカにおける簡便・高効率な標的遺伝子破壊

使用 CRISPR/Cas 系统简单高效地破坏青鳉体内的靶向基因

• 发表时间: 2013
• 作者: 安齋賢;木下政人
• 通讯作者: 木下政人

Behavioral alterations in medaka caused by serotonin deficiency in the raphe neurons

中缝神经元血清素缺乏引起的青鳉行为改变

• 发表时间: 2016
• 作者: Satoshi Ansai;Hiroshi Hosokawa;Shingo Maegawa;Youhei Washio;Kenji Sato;Masato Kinoshita
• 通讯作者: Masato Kinoshita

Efficient method for targeted mutagenesis in medaka using TALENs and CRISPR/Cas system

使用 TALEN 和 CRISPR/Cas 系统对青鳉进行靶向诱变的有效方法

• 发表时间: 2014
• 作者: Satoshi Ansai;Masato Kinoshita
• 通讯作者: Masato Kinoshita