Comprehensive analysis of periocular mesenchyme composition, specification and function during anterior segment formation

项目总结：中国 -- 遗传性和先天性视网膜前段发育不全(ASD)是视力障碍的主要原因之一。 损伤和失明。它们包括虹膜、角膜和人工晶状体的发育和眼球功能缺陷。 除了有明显的遗传易感性外，约50%的人还会患上青光眼。这是从近几年来进行的各种研究得出的结论。 越来越清楚的是，许多先天性发育障碍和易感性都是由早期发育障碍引起的。 缺陷，既有重大的问题，也有微妙的问题。在审视全球发展进程的同时，也引发了对这些关键问题的讨论。 因此，视觉视觉系统的组成部分为进一步研究这种疾病提供了一种卓有成效的方法。 细分市场在很大程度上来自于第一批早期迁移的神经脊细胞，这些细胞可能专门针对这些细胞。 眼球周围的视网膜间充质干细胞(POM)通常被松散地归类为眼球周围间充质干细胞。 在某些ASD的病例中还没有表现出缺陷。我相信这是我们努力工作中的一个主要障碍。 治疗和了解ASD一直以来都是POM早期生物学检查和功能检查的主要限制因素。 眼科疾病的发展。这阻碍了他们努力进一步确定该病的病因学特征，并在中国进行了筛查。 ASD适用于家庭，除了推迟IPSC调解的治疗ASD的方法的尝试外，还包括。 绕过这些问题，我们的目标是全面、准确地描述POM和电池的规格。 迁移、靶向、分化、迁移和迁移最终都是导致前段发育不全的原因。 下一步是合乎逻辑的步骤和必要的步骤，以使该领域的技术能够继续保持治疗方法和技术的新的演变趋势。 筛查青光眼和ASD疾病。我们目前的目标是测试POM的潜在假说。 细胞将其划分为各种不同的亚群，并指定成为主要前段的细胞。 为了测试我们的假设，我们将提出一种新的高度多才多艺的斑马鱼。 胚胎模型系统的建立和研究全面检查了POM和细胞的发育过程，同时对它们的细胞进行了分类 通过遗传学、分子生物学和体内医学成像的尖端技术，为移植前脑节段做出贡献。 方法。我们的具体目标是：目标1：确定规范的特征，并定义规范的主要构成要素。 美国医学会在体内使用了一种基因表达和分析的新组合技术，并将其与光片技术配对。 影像扫描和共聚焦显微镜的失误。目标2：追踪人类的迁徙行为和血统。 随着时间的推移，在前段角膜形成过程中，在体内使用光片，ASM的形成过程中，不同人群的ASM表达不同。 成像技术和激光共聚焦显微镜将其与一种全新的命运测绘和光遗传示踪机制相结合。 目标3：生成一个全面的ASM转录组数据，用于进一步筛选ASD患者的新靶点。 样本使用了流式细胞术的一种新的组合技术，并将其与RNAseq基因和下一代基因外显子组相结合。 测序。

PROJECT SUMMARY:    Inherited congenital anterior segment dysgenesis (ASD) disorders are a major cause of vision  impairment and blindness. They include developmental ocular deficiencies of the iris, cornea and lens  in addition to significant predisposition, ~50%, to glaucoma. From various studies in recent years it  has become clear that many congenital disorders and predispositions arise from early developmental  defects, both major and subtle. Examining the developmental process giving rise to these essential  components of the visual system is therefore a fruitful approach to studying the disease. The anterior  segment derives largely from the early migrating neural crest cells that target specifically to the  anterior of the developing retina and are loosely classified as periocular mesenchyme (POM). POM  deficiency has been demonstrated in certain cases of ASD. I believe a major roadblock in efforts to  treat and understand ASD has been the limited examination of POM biology and function during early  ocular development. This hampers efforts to characterize the etiology of disease and screening in  ASD families, in addition to delaying attempts at iPSC-­mediated approaches for treatment of ASD. To  circumvent these problems, we aim to comprehensively characterize POM cell specification,  migration, targeting, differentiation, and ultimately contribution to anterior segment dysgenesis. This is  the next logical and necessary step in order for the field to continue the evolution of therapy and  screening for glaucoma and ASD disorders. Our immediate goal is to test the hypothesis that POM  cells delineate into various subpopulations and specify to become the anterior segment  mesenchyme (ASM). To test our hypothesis we propose to employ the highly versatile zebrafish  embryo model system and comprehensively examine POM cell development while cataloging their  contribution to the anterior segment through genetic, molecular and cutting edge in vivo imaging  approaches. Our specific aims are: Aim 1: Characterize specification and define the composition of  the ASM the using a combination of gene expression analysis paired with light-­sheet in vivo time  lapse imaging and confocal microscopy. Aim 2: Track the migratory behavior and lineage trace  distinct populations of ASM during anterior segment formation using light-­sheet in vivo time lapse  imaging and confocal microscopy paired with a novel fate mapping optogenetic tracing mechanism.  Aim 3: Generate a comprehensive ASM transcriptome for screening novel targets in ASD patient  samples using a combination of flow cytometry coupled to RNAseq and next generation exome  sequencing.