SITE-SPECIFIC DNA INVERSION IN MORAXELLA LACUNATA

缺损莫拉氏菌中位点特异性 DNA 倒转

基本信息

  • 批准号:
    2187331
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 10.72万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    美国
  • 项目类别:
  • 财政年份:
    1993
  • 资助国家:
    美国
  • 起止时间:
    1993-08-01 至 1998-07-31
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

DNA rearrangements, involving deletion, inversion, transposition, or insertion, have been shown to control gene expression and development in numerous systems ranging from integration/excision of bacteriophage lambda to rearrangement of the gene segments of the mammalian immunoglobulin genes. the study of relatively simple DNA rearrangements in prokaryotes not only reveals the mechanisms controlling, for example, phase variation of surface antigens in microbial pathogens such as Borrelia hermsii, Neisseria gonorrhea, and Salmonella typhimurium but also provides models for understanding the regulation of gene expression in higher organisms. The objective of the work described in this proposal is to define the molecular details of the site-specific DNA inversion system of Moraxella lacunata. In M. lacunata, a causative agent in human conjunctivitis and keratitis, inversion of a chromosomal segment regulates the expression of two type 4 pilin genes. Preliminary characterization of the M. lacunata inversion system suggests that a novel mechanism for site-specific DNA inversion is utilized. The specific goals of this project are to determine the protein and DNA components of this inversion system and characterize how these elements interact to form a productive synaptic complex. A three step approach will be taken to accomplish these goals: 1) Define the essential genes and DNA sites for the recombination reaction in vivo and in vitro by insertion and deletion/substitution mutagenesis analyses of the subcloned inversion region, over-expression of identified recombination factors, and development of a defined in vitro system for the inversion reaction; 2) Characterize the interactions among the essential components of the inversion system using nuclease/chemical protection/interference assays; 3) Elucidate the molecular details of the recombination reaction using biochemical/physical assays of recombination intermediates, and mutational analyses of the recombinase and recombination sites.
DNA重排,包括缺失、倒位、转座或 插入,已经显示控制基因表达和发育, 从噬菌体的整合/切除 λ到哺乳动物的基因片段的重排 免疫球蛋白基因。 对相对简单的DNA重排的研究 不仅揭示了控制机制,例如, 微生物病原体中表面抗原的相变化, 疏螺旋体、淋病奈瑟菌和鼠伤寒沙门氏菌, 也为理解基因表达的调控提供了模型 在高等生物中。 本报告所述工作的目标 一项提议是确定位点特异性DNA的分子细节 腔隙莫拉氏菌倒位系统 In M.腔隙,使役 人类结膜炎和角膜炎的病原体,染色体倒位 片段调节两个4型菌毛蛋白基因的表达。 初步 对M.腔隙反转系统表明, 利用了位点特异性DNA倒位的新机制。 的 该项目的具体目标是确定蛋白质和DNA 这个反演系统的组成部分,并描述这些元素如何 相互作用形成一个有效的突触复合体。 三步方法 将采取以下措施来实现这些目标:1)确定必需基因 和用于体内和体外重组反应的DNA位点, 插入和缺失/取代诱变分析的亚克隆 倒位区,鉴定的重组因子的过表达, 和开发用于转化反应的限定的体外系统; 2)描述的基本组成部分之间的相互作用, 使用核酸酶/化学保护/干扰测定的转化系统; 3)使用阐明重组反应的分子细节 重组中间体的生化/物理测定,和 重组酶和重组位点的突变分析。

项目成果

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